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菌种的传代与保存

菌种的传代与保存


1、菌斜面(保存)


培养基应新鲜制备,如斜面已无冷凝水者,不宜再使用。标签上注明菌名及接种日期。


至冰箱取出的菌种斜面,应在室温放置约30分钟,待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。


点燃酒精灯,用左手握住菌种斜面,将管口靠进火焰旁,右手拿接种棒后端,将接种环烧红30秒,随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼,往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼,右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞,拨开棉塞,将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下,稍冷却再移至菌苔上,刮去少量菌苔,随即取出接种棒,并将菌种管口移至火焰旁。


堵上棉塞,左手将菌种管放下,取营养琼脂斜面1支,照上述操作打开棉塞,将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部,由底向上,将接种环轻贴斜面的表面曲折移动,使xi 菌划在斜面的表面上。


取出接种棒,在火焰旁将培养基管棉塞堵上,然后将接种过xi 菌的接种棒在火焰上烧灼灭jun。


将已接种毕的xi 菌管置35~37℃培养22~24小时,霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存,一般 3个月转种一次。


2、菌斜面-营养肉汤-分离平板-菌斜面


如果菌落形态不典型可纯化,按下列方法传代(分离菌落):用接种环取上述菌管(斜面)菌苔少许接种置营养肉汤中(5mL/支,已灭jun),置35~37℃培养18~24小时后,再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液(浓菌液),接种于分离平板,置35~37℃培养18~24小时,用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面,置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管,其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中,其它用做工作菌种。


常用分离平板包括:大肠埃希菌——EMB琼脂平板;铜绿假单胞菌——溴化十六烷*铵琼脂培养基;金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基。