细胞培养具体操作步骤:
一、准备工作:
* 清洁和消 毒所有工作台面、工具和培养容器,通常使用70%酒精擦拭。
* 穿戴适当的实验室防护装备,如实验服、套和口罩。
二、培养基的制备:
* 根据所需细胞类型,配制适宜的培养基,这通常包括基础培养基、血清、抗生 素和其他生长因子。
* 确保所有培养基成分均为无菌, 并在37°C、5% CO?的恒温箱中预热。
三、细胞传代:
* 从现有细胞培养中取出一部分细胞,通常使用胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞。
* 将消化后的细胞悬液转移到新的培养瓶中,加入适量的培养基,以稀释细胞并促进其生长。
四、培养细胞:
* 将含有细胞的培养瓶放入恒温箱中,维持适宜的温度、湿度和CO?浓度。
* 定期观察细胞生长情况,使用倒置显微镜检查细胞形态和密度。
五、细胞收获:
* 当细胞达到适当的生长密度时,再次使用胰蛋白酶EDTA溶液消化细胞。
* 收集细胞悬液,并通过离心分离细胞。
六、细胞计数和种植:
* 使用细胞计数板或自动细胞计数器计算细胞数量。
* 根据实验需要,将细胞种植到新的培养容器中。
七、细胞冻存:
* 如果需要长期保存细胞,可以在细胞生长至对数生长期时进行冻存。
* 将细胞与冻存保护剂混合,缓慢冷却至-80°C ,然后转移到液氮罐中保存。
八、质量控制:
* 定期进行细胞株的鉴定,以确保其身份和纯度。
* 检测细胞培养中的微生物污染,如细 菌、真 菌和病毒。
九、废弃物处理:
* 所有使用过的培养基、细胞悬液和其他废弃物都应按照生物危险废物处理规定进行处置。
* 请注意,这些步骤是通用的,并可能需要根据特定细胞类型、实验目的和实验室条件进行调整。在进行细胞培养时,应严格遵守无菌操作规程,以避免污染。此外,对于特定的细胞类型,可能还需要额外的培养条件和培养基配方。