一、 实验原理:
细胞迁移即细胞划痕法,是测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口痊愈模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素、外源性基因等组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为**一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”痊愈。
二、 实验材料与仪器
倒置荧光显微镜 (Olympus, IX71型),细胞培养箱 (Thermo)
三、 实验方法
1、培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一个视野)。
2、细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。
3、细胞铺满板底后,用1ml枪头垂直于孔板**细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头**划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法*大的缺陷)。
4、吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。
5、加入无血清培养基,拍照记录。
6、将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。
7、根据收集图片数据分析实验结果。