细胞冻存实验流程:
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液。
2. 取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3. 离心1 000 rpm,5 min。
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的后面密度为5×106/ml~1×107/ml。
5. 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml。
6. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。
7. 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2 h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。