ELISA包被细胞过程:
1. 在 96 孔培养板上接种细胞数为 1 x 104 cells/well ,37℃过夜培养。
2. 第2天用 PBS 洗涤培养板 2-3 次。
3. 加入 125 µl/well 10% Formalin(1:10 稀释) , 室温下固定 15 min。
4. 用 ddH2O 洗涤培养板 3 次,并晾干,储藏在 2-8oC 备用。
5. 用 PBST 洗涤 3 次,每孔加入 150 μl 1% BSA 37 oC 封闭 1 小时。
6. PBST 洗涤 3 次后,每孔加入 100 μl 不同倍比稀释度的血清,并加入对照样
品, 37 oC 孵育 2 小时。
7. PBST 洗涤 5 次后, 加入 100 μl 稀释后的 HRP 标记的二抗,37 oC 孵育 1 小时。
8. PBST 洗涤 5 次后,显色剂显色 20min 后,酶标仪上读取 A405 吸收值。
50mM 的碳酸盐包被缓冲液: 0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃,保存, Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至 100 ml。