细胞传代培养是一种重要的实验技术,其主要目的是维持和扩增特定类型的细胞群体,并为研究提供足够数量和质量的细胞材料。细胞在培养过程中会不断地增殖,但是培养容器的空间有限,细胞浓度过高时会出现接触抑制,影响细胞的生长状态,因此当细胞培养到一定的时间需要进行细胞传代的操作,把其中一部分细胞分到别的培养皿/瓶中,使得细胞能够继续扩增。
细胞培养的基本步骤:
1、原代培养:从供体内取出组织,经机械或消化分离成单个细胞或单一型细胞群,在无菌、适当温度和营养条件下,生存、生长和繁殖。简单步骤为:剪切组织-消化分离-扩增培养。
2、传代培养:当细胞密度达到80%~90%时,去掉培养基,用PBS清洗,加入胰蛋白酶消化,分离细胞,再按一定比例接种到新的培养瓶中。一般2~3d后应换一次生长液。
3、体内细胞培养:将瘤细胞悬液接种到动物体内,形成肿瘤,再从肿瘤中分离细胞,进行培养。
4、细胞冻存:将细胞悬液与冻存液按一定比例混合,装入冻存管,放入-80℃冰箱,若需长期保存需要再转移到液氮中。
5、细胞复苏:将冻存细胞从液氮中取出,迅速在37℃水浴中解冻,加入预热的含血清的培养基,离心,弃上清液,加入新的培养基,放入孵箱中,培养。冻存与细胞复苏需要遵循慢冻速溶的原则。