操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称:CDK6 (phospho-Tyr13) Antibody
规格:详见说明
测试方法:详见说明
客户自备仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
特点:
1、优化设计的实验方案,1小时即可完成
2、灵敏度高,操作便捷
3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂
常见样本处理方法:
1、血清(浆)样品:直接检测。
2、组织:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,
加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
实验通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体英文名称:Mint3 0.2ml 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Lipocalin-2/NGAL)ELISA试剂盒 Lipocalin-2/NGAL ELISA Kit
磷酸化β 连环素蛋白抗体英文名称:phospho-beta catenin (Tyr142) 0.1ml 趋化因子受体3(CCR3)ELISA试剂盒 CCR3 ELISA Kit
19号染色体开放阅读框57抗体英文名称:C19orf57 0.1ml 骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA试剂盒 MPIF-1/CCL23 ELISA Kit
9号染色体开放阅读框103抗体英文名称:C9orf103 0.2ml 真核翻译起始因子6(EIF6)ELISA试剂盒 EIF6 ELISA Kit
细胞表面趋化因子受体2抗体英文名称:CXCR2 0.1ml 血管紧张素Ⅱ受体2(AGTR2)ELISA试剂盒 AGTR2 ELISA Kit
早期B细胞因子1抗体英文名称:EBF1 0.2ml 肾上腺髓质素2(ADM2)ELISA试剂盒 ADM2 ELISA Kit
人基质金属蛋白酶9/明胶酶BMMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit 96T
热休克蛋白70抗体英文名称:HSP70 0.1ml 泛酸激酶1(PANK1)ELISA试剂盒 PANK1 ELISA Kit
活化蛋白激酶D抗体英文名称:Jun D 0.1ml RasGTP酶激活蛋白1(RASA1)ELISA试剂盒 RASA1 ELISA Kit
素皮质素4受体抗体英文名称:MC4 Receptor 0.1ml
嗅觉受体家族2亚基4抗体英文名称:OR2A4 0.2ml
组蛋白甲基转移酶SMYD2抗体英文名称:SMYD2 0.2ml
热休克蛋白75抗体英文名称:TRAP1 0.2ml
视神经视网膜相关蛋白VAX2抗体英文名称:VAX2 0.2ml
兔抗猴IgG抗血清Rabbit anti-Monkey IgG whole serum 1ml
PE-Cy5.5标记的兔抗猴IgGRabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy5.5 0.1ml
CDK6 (phospho-Tyr13) AntibodyRustigian氏尿素培养基基础 250(g) Bacillus sp. 冻干粉
甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP) 250(g) Pseudoalteromonas rubra 冻干粉
结晶紫中性红胆盐琼脂 1000(g) Patulibacter ginsengiterrae 冻干粉
Peptone P 蛋白胨P Oxoid500g Zygosaccharomyces parabailii 冻干粉
RPMI 1640,(1X),液体(IVD) 含25mM HEPES,和L-谷氨酰胺22400-089 酿酒酵母 冻干粉
Test agar fo the residue test acc.to KUNDRAT测试琼脂(残余测试) 1.10662.0500MERCK默克 海洋嗜杀酵母 冻干粉
一号植物蛋白胨 Vegetable Peptone No.1 Oxoid500g 光伏希瓦氏菌 冻干粉
MacConkey Agar Paecilomyces formosus 冻干粉
Baird-Parker Agar Base 红色毛癣菌 冻干粉
胰蛋白示琼脂基础 (CM0233) Oxoid 嗜松青霉 冻干粉
SC琼脂基础 250(g) 絮状表皮癣菌 冻干粉
GC琼脂 250用于淋球菌的分离培养(OXOID方法) 须癣毛癣菌 冻干粉
脑心浸出液肉汤 (CM0225) Oxoid 绿色木霉菌 冻干粉
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