操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称:PKCθ (Ab-695) Antibody
规格:详见说明
测试方法:详见说明
客户自备仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
特点:
1、优化设计的实验方案,1小时即可完成
2、灵敏度高,操作便捷
3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂
常见样本处理方法:
1、血清(浆)样品:直接检测。
2、组织:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,
加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
实验通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
甘氨鹅脱氧胆酸钠 Glycochenodeoxycholic Acid Sodium Salt 16564-43-5 质量规格:>97%,BR 组织CSF1R激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
BGJ398(NVP-BGJ398) BGJ398(NVP-BGJ398) 872511-34-7 质量规格:>98%,FGFR抑制剂 细胞CLK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
BMN-673 BMN673 1207456-01-6 质量规格:>98% 组织CLK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
星孢素 Staurosporine 62996-74-1 质量规格:>98%,进分 细胞EGFR激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
苯唑西林钠 Oxacillin sodium 7240-38-2 质量规格:>850μg/mg,BR 组织EGFR激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
苯唑西林钠(标准品) Oxacillin sodium 7240-38-2 质量规格:标准品用于含量测定 细胞EPHA1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
维E烟酸酯(标准品) (±)-α-Tocopherol nicotinate 51898-34-1 质量规格:HPLC≥98%,标准品 组织EPHA1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
荧光素-5-马来酰亚胺 Fluorescein-5-maleimide 75350-46-8 质量规格:HPLC>97.0%,进口 细胞EPHA3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
Veliparib (ABT-888) Veliparib (ABT888) 912444-00-9 质量规格:>98% 组织EPHA3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
萘夫西林钠 Nafcillin sodium salt monohydrate 7177-50-6 质量规格:>98%,BR 细胞EPHB2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
萘夫西林钠(标准品) Nafcillin sodium salt monohydrate 7177-50-6 质量规格:HPLC>98%,标准品 组织EPHB2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
阿托西班,醋酸阿托西班 Atosiban Acetate 90779-69-4 质量规格:>98%,BR 细胞EPHB3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
曲格列汀 Trelagliptin free base 865759-25-7 质量规格:>98%,BR 组织EPHB3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
头孢噻肟钠,噻孢霉素,头孢霉素,先锋霉素I Cefotaxime Sodium 64485-93-4 质量规格:Purity>97%,Potency920ug/mg,USP 细胞EPHB4激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
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小鼠激肽原1(KNG1)ELISA试剂盒 英文名: KNG1 ELISA Kit
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大鼠细胞功能关联抗原2(LFA2)ELISA试剂盒 英文名: LFA2 ELISA Kit
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小鼠速激肽受体2(TACR2)ELISA试剂盒 英文名: TACR2 ELISA Kit
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小鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)ELISA试剂盒 英文名: TNNI3 ELISA Kit
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