人肿瘤坏死因子γELISA检测试剂盒

操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注：本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。本公司产品仅用于科研实验。

产品名称：人肿瘤坏死因子γELISA检测试剂盒
英文名称：Tumor necrosis factor γ

检测范围：2.5pg/mL~80pg/mL

灵敏度：0.1

产品货号：BJ-H64978
规格：48T/96T
主要成分：酶标板,试剂,标准品等。
试剂盒种属：马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..

组成：
48孔配制：
1.说明书: 1份
2. 封板膜:  2片（48）
3. 密封袋:  1个
4  酶标包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 标准品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 标准品稀释液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶标试剂:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 显色剂A液： 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .显色剂B液：  3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置：
1.  产品名称说明书:1份
2.  封板膜:2片（96）
3.  密封袋: 1个
4.  酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)
5.  标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6.  标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7.  酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8.  样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9.  显色剂A液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 显色剂B液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第 5 步封闭。 
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜； 
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育
30 min； 
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37
℃湿盒中孵育 30 min； 
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）； 
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色； 
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明； 
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片； 
17.观察成像： 显微镜下观察成像。 

注意事项:
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．  如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数（×5×n）。
5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准
辛磷;纯品型;标准品;有证书 CAS 14816-18-3 订购|咨询  规格： 0.1g

黄芪甲苷（黄芪皂苷IV）-对照品;有报告 CAS 83207-58-3 订购|咨询  规格： 20mg

维生素B5（泛酸钙B5）;纯品型;标准品 CAS 137-08-6 订购|咨询  规格： 0.1g

7-beta-羟基胆固醇 CAS 566-27-8 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

莪术二烯 CAS 24268-41-5 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

辛可宁 CAS 1479173 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

3-氧代乌索烷-12-烯-28-羧酸 CAS 6246-46-4 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

长春宁 CAS 162652-95-1 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

卡维丁 CAS 32728-75-9 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

植酸锌 CAS 63903-51-5 订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

银杏酚酸 CAS  订购|咨询  规格： HPLC≥98%;20mg

人肿瘤坏死因子γELISA检测试剂盒GDN/SERPINE2  胶质源性连接蛋白抗体 规格: 0.2mlGPBB/PYGB  脑糖原磷酸化酶抗体 规格: 0.2ml

FBXL5  FBXL5蛋白抗体 规格: 0.2mlARSA  芳香基硫酸酯酶1抗体 规格: 0.2ml

RNASE4/Angiogenin  管**素核糖核酸酶4抗体(肌萎性侧索硬化症蛋白) 规格: 0.1mlBcl2A1  BCL2相关蛋白A1抗体 规格: 0.1ml

DR3/APO3/TWEAK  死亡受体3抗体 规格: 0.1mlArfaptin 2  ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体 规格: 0.2ml

ADAM11  去整合素样金属蛋白酶11抗体 0.2mlPAK1  p21激活激酶1抗体 规格: 0.1ml

Phospho-DARPP32(Thr34)  磷酸化多巴胺/cAMP调节神经磷蛋白抗体 规格: 0.1mlIKAROS  锌指蛋白IKAROS抗体 规格: 0.2ml

Aurora A/ARK-1/AURKA  有丝分裂激酶A抗体 规格: 0.1mlKAT2B/ GCN5/PCAF  组蛋白乙酰转移酶PCAF抗体 规格: 0.1ml

CK8  细胞角蛋白8抗体 规格: 0.1mlMAGEF1  黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗体 规格: 0.2ml

MYH9  肌球蛋白重链9抗体 规格: 0.2mlSA2  粘结蛋白SA2抗体 规格: 0.2ml

phospho-PKC delta (Thr505)  磷酸化蛋白激酶C亚性D型抗体 规格: 0.1mlCCL20/MIP3 alpha  巨噬细胞炎性蛋白MIP-3a抗体 规格: 0.1ml

APOE/Apo E2  载脂蛋白E抗体 规格: 0.1mlFOXN1  叉蛋白N1抗体 规格: 0.2ml