ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要**价廉、**、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
产品名称:大鼠延胡索酸酶ELISA检测试剂盒
英文名称:nicotinamide adenine dinucleotide
检测范围:0.25ng/mL~8ng/mL
灵敏度:0.1
产品货号:BJ-R70129
产品规格:48T/96T
产品保存:2-8℃,有效期6个月
主要组成成分:试剂
性状:液体
产品规格:96T/48T
96T指可以做94个标本,2个标准对照
48T指可以做47个标本,1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
待检样本:体液,血清,血浆,细胞培养上清液,尿液,组织匀浆,心房水标本等等。
本公司产品仅用于科研实验。
样品收集、处理及保存方法
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
组成结构:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分:
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
2,2'-二羟基二苯醚(>98.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxydiphenyl Ether 15764-52-0 质量规格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅷ 进口/国产 规格:细活性化蛋白制备
4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 质量规格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅸ 进口/国产 规格:真/酵母细胞裂解液
4-叔丁基二苯硫醚(>98.0%(GC)) 4-tert-Butyldiphenyl Sulfide 85609-03-6 质量规格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅸ 进口/国产 规格:真/酵母细胞超强裂解液
双(4-羟苯基)硫醚(>98.0%(GC)) Bis(4-hydroxyphenyl) Sulfide 2664-63-3 质量规格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅹ 进口/国产 规格:真/酵母细胞活性化蛋白制备
5,5'-硫代双水杨酸(>98.0%(GC)(T)) 5,5'-Thiodisalicylic Acid 1820-99-1 质量规格:>98.0%(GC)(T) 裂解液ⅩI 进口/国产 规格:非变性细胞蛋白制备
4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC)) 4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone 29411 质量规格:>98.0%(GC) 10%AEBSF溶液 进口/国产 规格:完全保留细胞内成分活性
双[3,5-二溴-4-(2-羟乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC)) Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 53714-39-9 质量规格:>96.0%(GC) RIPA基础裂解液 进口/国产 规格: 不含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂
双[4-(2-羟乙氧基)苯基]砜(>97.0%(GC)) Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 27205-03-4 质量规格:>97.0%(GC) RIPA完全裂解液 进口/国产 规格:含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂
二苯砜-3,3'-二磺酸二钠盐(>95.0%(T)) Diphenylsulfone-3,3'-disulfonic Acid Disodium Salt 39616-93-8 质量规格:>95.0%(T) 通用型非变性裂解液 进口/国产 规格:适合各种细胞native蛋白
3,3',4,4'-二苯基砜四羧酸二酸酐(>97.0%(HPLC)(T)) 3,3',4,4'-Diphenylsulfonetetracarboxylic Dianhydride 2540-99-0 质量规格:>97.0%(HPLC)(T) 10X通用型非变性裂解液 进口/国产 规格:适合各种细胞native蛋白
二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二钠(>98.0%(HPLC)(T)) Disodium Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate 51698-33-0 质量规格:>98.0%(HPLC)(T) 无去垢剂裂解液 进口/国产 规格:用于物理裂解
双酚 C(>98.0%(GC)) 2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane 79-97-0 质量规格:>98.0%(GC) 动物样品二维电泳裂解液 进口/国产 规格:用于动物/人体细胞或组织蛋白二维电泳
4,4'-异亚丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T)) 4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid 3539-42-2 质量规格:>98.0%(HPLC)(T) 细样品二维电泳裂解液 进口/国产 规格:用于细蛋白二维电泳
四溴双酚A(>98.0%(GC)(T)) Tetrabromobisphenol A 79-94-7 质量规格:>98.0%(GC)(T) 酵母样品二维电泳裂解液 进口/国产 规格:用于酵母蛋白二维电泳
大鼠延胡索酸酶ELISA检测试剂盒小鼠 IL13Ra2 基因全长ORF克隆gremlin 骨形态形成蛋白拮抗蛋白抗体规格: 0.1ml
小鼠 LCN2 / NGAL 基因全长ORF克隆GnRHR 促性腺释放受体抗体规格: 0.1ml
小鼠 MCSFR / CSF1R 基因全长ORF克隆GRP75 G蛋白偶联受体75抗体规格: 0.2ml
小鼠 Integrinalpha11 基因全长ORF克隆GPA/GYPA/CD235a 血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体规格: 0.1ml
小鼠 MEP1A 基因全长ORF克隆GPR78 G蛋白偶联受体78抗体规格: 0.2ml
小鼠 sFRP-5 基因全长ORF克隆KiSS1R/GPR54 G蛋白偶联受体54抗体规格: 0.1ml
小鼠 IL34 转录变体1 基因全长ORF克隆GPR109A/HM74A G蛋白偶联受体109A抗体规格: 0.2ml
小鼠 Integrinbeta1 基因全长ORF克隆G protein alpha S G蛋白αS抗体(鸟嘌呤核苷酸结合蛋白Gα s)规格: 0.2ml
小鼠 sFRP-4 基因全长ORF克隆GPX1 谷胱甘肽过氧化酶1规格: 0.2ml
小鼠 SCARB2 基因全长ORF克隆GRK1 G蛋白偶合受体激酶1抗体规格: 0.1ml
小鼠 LGMN / AEP 基因全长ORF克隆GPX3 谷胱甘肽过氧化酶3规格: 0.1ml
小鼠 LXN / Latexin 基因全长ORF克隆GPX4 谷胱甘肽过氧化酶4抗体规格: 0.2ml
小鼠 Integrinalpha4 基因全长ORF克隆GRK2/BARK1/ADRBK1 G蛋白偶合受体激酶2抗体规格: 0.1ml
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