ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要**价廉、**、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
产品名称:核因子κB受体活化因子配基试剂盒
产品货号:BJ-100099
产品规格:48T/96T
产品保存:2-8℃,有效期6个月
主要组成成分:试剂
性状:液体
产品规格:96T/48T
96T指可以做94个标本,2个标准对照
48T指可以做47个标本,1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
待检样本:体液,血清,血浆,细胞培养上清液,尿液,组织匀浆,心房水标本等等。
本公司产品仅用于科研实验。
样品收集、处理及保存方法
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
组成结构:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分���
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
4-酮盐酸盐,水合4-Piperidone hydrate hydrochloride40064-34-410G
D-烯丙基甘氨酸盐酸盐D-Allylglycine hydrochloride108412-04-0250MG
N-氨基盐酸盐N-Aminopiperidine hydrochloride63234-70-85G
1-(氯-1-吡咯烷基亚...Chlorodipyrrolidinocarbenium hexafluor...135540-11-35G
4-(4,6-二甲氧基三...DMTMM3945-69-51G
(R)-3-羟基吡咯烷盐...(R)-3-Hydroxypyrrolidine hydrochloride104706-47-01G
3-羟基氮杂环丁烷盐...3-Hydroxyazetidine Hydrochloride,≥98.0%18621-18-6250MG
2-氯甲基-3,5二甲基...2-(Chloromethyl)-4-methoxy-3,5-dimethy...86604-75-35G
S-甲基异硫脲硫酸盐S-Methylisothiourea Sulfate,≥98.0%867-44-7100G
DL-高半胱氨酸硫内...DL-Homocysteine thiolactone hydrochlor...6038-19-325G
4-吡啶乙酸盐酸盐4-Pyridineacetic Acid Hydrochloride,≥...6622-91-91G
1H-吡唑-1-甲脒盐酸盐1-Amidinopyrazole Hydrochloride7754455G
核因子κB受体活化因子配基试剂盒Galectin 7 半糖凝集素7抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/FITC FITC标记的兔抗亲和素 规格: 0.1ml
PPAP2A 磷酸脂磷酸水解酶1抗体 规格: 0.1mlP2Y4 P2Y4受体抗体 规格: 0.1ml
Phospho-CHK2 (Thr68) 磷酸化细胞周期检测点激酶2抗体 规格: 0.1mlRabbit anti-horse IgG whole serum 兔抗马IgG抗清 规格: 1ml
IL-33/NFHEV 白介素33抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的驴抗兔IgG 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗生物素抗体IgG 规格: 0.1mlPGGT1β 香叶烯基转移酶1β抗体 规格: 0.2ml
Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1mlGlycogen synthase 1 葡萄糖合成酶1抗体 规格: 0.2ml
Aurora B/STK-1 有丝分裂激酶B抗体 规格: 0.1mlphospho-PPAR alpha(Ser12) 磷酸化α型-过氧化酶活化增生受体抗体 规格: 0.1ml
SHP-1 造细胞磷酸酶抗体 规格: 0.1mlMTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 管紧张素Ⅱ2型受体相互作用蛋白抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgM/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗马IgM 规格: 0.1mlIL-6 白介素6抗体 规格: 0.1ml
NGFR/p75NTR 神经生因子受体抗体 规格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗马IgG 规格: 0.1ml
LAP3 亮氨酸氨基肽酶3抗体 规格: 0.2mlNDUFA9 NDUFA9蛋白抗体 规格: 0.2ml
Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗体 规格: 0.1mlDGAT1/Diglyceride acyltransferase 二脂酰甘油酰基转移酶抗体 规格: 0.2ml
SLY 2型猪链球溶素抗体 规格: 1mlC17orf78 17号染色体开放阅读框78抗体 规格: 0.2ml
Na+/K+-ATPase Alpha1 Na+/K+-ATPase α1 钠钾ATP酶α1多肽抗体 规格: 0.2mlFBXW12/FBXO35 FBXW12蛋白抗体 规格: 0.2ml
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