操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
注:本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。本公司产品仅用于科研实验。
产品名称:γ球蛋白试剂盒
产品货号:BJ-100418
规格:48T/96T
主要成分:酶标板,试剂,标准品等。
试剂盒种属:马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..
组成:
48孔配制:
1.说明书: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1个
4 酶标包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 标准品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 标准品稀释液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 显色剂A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .显色剂B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 产品名称说明书:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1个
4. 酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 显色剂A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 显色剂B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E(1:50~200,终浓度 5~20 nM),37
℃湿盒中孵育 30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准
羊抗人IgA (α链特...Anti-Human IgA (α-chain spec.)-Gold p...Null0.5ML
兔抗豚鼠IgG (胶体...Anti-Guinea Pig IgG-Gold antibody prod...Null0.5ML
兔抗羊IgG (胶体金...Anti-Goat IgG-Gold antibody produced i...Null0.5ML
兔抗鸡IgG (胶体金...Anti-Chicken IgG-Gold antibody produce...Null0.5ML
兔抗绵羊IgG (生物...Anti-Sheep IgG-Biotin antibody produce...Null0.5ML
羊抗大鼠IgG (生物...Anti-Rat IgG-Biotin antibody produced ...Null0.5ML
羊抗兔IgG (生物素...Anti-Rabbit IgG-Biotin antibody produc...Nul0.5ML
羊抗猪IgG (生物素...Anti-Pig IgG-Biotin antibody produced ...Null0.5ML
2,6-二硝基苯酚2,6-Dinitrophenol (≥95%)573-56-81G
羊抗小鼠IgG (生物...Anti-Mouse IgG-Biotin antibody produce...Null.0.5ML
羊抗人IgM (生物素...Anti-Human IgM-Biotin antibody produce...Null0.5ML
羊抗人IgG (生物素...Anti-Human IgG-Biotin antibody produce...Null0.5ML
γ球蛋白试剂盒LAIR-2/CD306 白细胞相关球蛋白样受体2抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的驴抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml
Calpain 12 钙激活蛋白酶12抗体 规格: 0.2mlC9orf72 9号染色体开放阅读框72抗体 规格: 0.2ml
MRP9/ABCC12 多药耐药相关蛋白9抗体 规格: 0.2mlProtein G 重组蛋白G抗体 规格: 0.1ml
JMJD5 组蛋白去甲基化酶JMJD5抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-Guinea pig IgM/APC APC标记的兔抗豚鼠IgM 规格: 0.1ml
GPX4 谷胱甘肽过氧化酶4抗体 规格: 0.2mlFMN2 形成素2抗体(成蛋白) 规格: 0.2ml
Cyclin E 周期素E抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1ml
GIDRP88 生抑制和分化相关蛋白抗体 规格: 0.2mlNAPSIN A/ASP4 天冬氨酸蛋白酶ASP4抗体 0.2ml
PEPT2/SLC15A2 肠道肽转运蛋白2抗体 规格: 0.1mlTSEN2 tRNA剪接内切酶2抗体 规格: 0.2ml
DHRS2 脱酶/还原酶家族成员2抗体 规格: 0.2mlTMEM173 跨膜蛋白173抗体 规格: 0.2ml
phospho-PIK3C3(Ser676) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位3抗体 规格: 0.1mlUPP1/Uridine Phosphorylase 1 尿嘧啶核苷磷酸化酶1抗体 规格: 0.2ml
RanBP7/Importin 7 RAN结合蛋白7抗体 规格: 0.2mlCREB-1 环苷酸应答元件结合蛋白抗体 规格: 0.1ml
Tal1 T细胞急性细胞性白病1蛋白/瘤蛋白5抗体 规格: 0.2mlGANAB/alpha Glucosidase II α葡萄糖苷酶2抗体 规格: 0.1ml
BKCa channels/KCNMA 钙激活钾通道蛋白抗体 规格: 0.1mlIQCF1 IQCF1蛋白抗体 规格: 0.2ml
PCNA 增细胞核抗原抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-Goat IgG/PE PE标记的驴抗羊IgG 规格: 0.1ml
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