注:本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。本公司产品仅用于科研实验。
产品名称:磷脂酰肌醇抗体IgG;IgM试剂盒
产品货号:BJ-105286
规格:48T/96T
主要成分:酶标板,试剂,标准品等。
试剂盒种属:马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..
组成:
48孔配制:
1.说明书: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1个
4 酶标包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 标准品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 标准品稀释液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 显色剂A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .显色剂B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 产品名称说明书:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1个
4. 酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 样品稀释液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 显色剂A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 显色剂B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 终止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E(1:50~200,终浓度 5~20 nM),37
℃湿盒中孵育 30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值)��请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准
腺苷 (细胞培养级)Adenosine (≥99%, cell culture tested)58-61-75G
地衣红Orcein (certified by the Biological St...1400-62-01G
百里酚蓝Thymol Blue (indicator, Dye content, ...76-61-95G
甲酰胺Formamide (≥99.5%,GC)27735100ML
5,5'-二硫双-(2-硝...5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid), ...69-78-31G
N,N-二甲基甲酰胺 (...N,N-Dimethylformamide (≥99.8%)25174500ML
胆酸钠Sodium Cholate (≥99%)206986-87-010G
胆酸Cholic acid (from ox or sheep bile, ≥...81-25-425G
聚乙烯吡咯烷酮Polyvinylpyrrolidone 10 (PVP10)9003-39-825G
天狼猩红Sirius Rose BB (Standard Fluka, for mi...2829-43-85G
詹纳斯绿 BJanus Green B (certified by the Biolog...2869-83-21G
印度墨水India ink (certified by the Biological...Null100ML
磷脂酰肌醇抗体IgG;IgM试剂盒Integrin Alpha V + Beta 3 (CD51+CD61) 整合素αVβ3抗体 规格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗羊IgG 规格: 0.1ml
PAK2 p21激活激酶2抗体 规格: 0.1mlMSH gamma 促黑细胞γ抗体 规格: 0.2ml
Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格: 0.1mlSSDD/Steroid sulfatase 类固醇硫酸酯酶抗体 规格: 0.1ml
LDL 低密度脂蛋白抗体 规格: 0.1mlHyp/hydroxyproline 羟脯氨酸抗体 规格: 0.2ml
Ryanodine Receptor 心肌兰尼碱受体抗体(脑肌兰尼碱受体) 规格: 0.2mlFLIP 凋亡调节基因之一抗体(短型) 规格: 0.1ml
APRIN/PDS5B 雄诱导增抑制蛋白抗体 规格: 0.2mlGDF8 生分化因子8/肌肉抑制素抗体 规格: 0.2ml
Orai2 跨膜蛋白Orai2抗体 规格: 0.2mlCD44v6 CD44V6抗体 规格: 0.1ml
Piwil2/Mili piwi样2蛋白抗体 规格: 0.2mlphospho-NFKB p65(Thr505) 磷酸化细胞核因子抗体 规格: 0.1ml
FRMD8 FRMD8蛋白抗体 规格: 0.2mlPhospho-PTEN(Ser380) 磷酸化瘤抑制基因PTEN抗体 规格: 0.1ml
NADPH 还原型辅酶Ⅱ抗体 规格: 0.1mlCTNNAL1 粘附分子相关蛋白a1抗体 规格: 0.1ml
GstP1/GST class-pi 谷胱甘肽硫转移酶pi基因抗体 规格: 0.1mlZNF300 锌指蛋白300抗体 规格: 0.2ml
ApoA4 载脂蛋白A4抗体 规格: 0.1mlELK1 细胞转录因子ELK1抗体 规格: 0.1ml
Casein Kappa/CSN3/COPS3 K-酪蛋白抗体 规格: 0.1mlIntegrin beta 7 整合素β7抗体 规格: 0.1ml
操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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