ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要**价廉、**、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
产品名称:磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶试剂盒
产品货号:BJ-105289
产品规格:48T/96T
产品保存:2-8℃,有效期6个月
主要组成成分:试剂
性状:液体
产品规格:96T/48T
96T指可以做94个标本,2个标准对照
48T指可以做47个标本,1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
待检样本:体液,血清,血浆,细胞培养上清液,尿液,组织匀浆,心房水标本等等。
本公司产品仅用于科研实验。
样品收集、处理及保存方法
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
组成结构:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内**的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分:
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
氯化硝基四氮唑蓝Nitrotetrazolium Blue chloride (≥98%,...298-83-9100MG
氯化硝基四氮唑蓝 (...Nitrotetrazolium Blue chloride (for mo...298-83-950MG
噻唑蓝 (常规)Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (≥...298-93-1250MG
噻唑蓝 (培养级)Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (ce...298-93-1100MG
甲基红Methyl Red (pH indicator, pH 4.4 to 6.0)493-52-75G
甲基绿Methyl Green (Dye content, ≥85%)19044401G
亚甲基蓝Methylene blue (Dye content, ≥82%)7220-79-310G
苏木素Hematoxylin (certified by the Biologic...517-28-25G
吉姆萨染料Giemsa stain (for use as a blood stain)51811-82-61G
荧光胺Fluorescamine (≥98%, TLC, powder)38183-12-9100MG
二乙酸荧光素Fluorescein diacetate (for fluorescenc...596-09-81G
甲苯胺蓝Toluidine Blue (Standard Fluka, for mi...17116235G
磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶试剂盒Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗兔IgM 规格: 0.1ml
CLNS1A/pICln 氯离子通道调节蛋白1A抗体 规格: 0.2ml
Alpha B Crystallin/HSPB5 热休克蛋白β5抗体 规格: 0.1ml
CD66c/CEACAM6 胚抗原相关细胞粘附分子抗体 规格: 0.2ml
BTK/ATK 蛋白酪氨酸激酶ATK抗体 规格: 0.2ml
Pectinesterase 果胶酶抗体 规格: 1ml
SMARCD3 肌动蛋白依赖染色质调控因子SMARCD3蛋白抗体 规格: 0.2ml
CYP46 胆固醇24羟化酶抗体 规格: 0.2ml
Acinus Acinus抗体 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗羊IgG 规格: 0.1ml
Pumilio 1 PUM1蛋白抗体 规格: 0.2ml
Cytochrome c oxidase subunit 2 细胞色素c氧化酶亚型2抗体 规格: 0.1ml
Phospho-Smad3(Ser208) 磷酸化细胞信号转导分子SMAD3抗体 规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 规格: 0.1ml
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