细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
原代细胞分离：
订购信息：
英文简称：RKO细胞
产品名称：结肠癌细胞（低分化）；RKO
货号：BJ-01X8545
规格：T25
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
特征特性:RKO是一个低分化的结肠癌细胞系。RKO细胞含有野生型P53，但缺乏人甲状腺受体核受体(h-TRbeta1)。RKO细胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6细胞。RKO细胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的亲本细胞系。该细胞系在裸鼠中成瘤，且在软琼脂中形成集落。
培养条件:DMEM(高糖）+10%FBS
传代方法:消化CQ-5分钟。1:2。3天内可长满
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库各地均可发货，统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
一、细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从干扰组细胞数大于对照组的事实说明可促进细胞增殖的结论。所以直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。
四、细胞周期检测技术
细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。
五、细胞凋亡检测
常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，Hoechst染色，电镜，TUNEL。
OVCA2 卵巢癌相关基因2蛋白抗体规格: 0.2ml
PRUNE/DRES17 乳腺癌相关蛋白DRES17抗体规格: 0.2ml
TEM7R/Plxdc2 肿瘤血管内皮标记相关蛋白质7抗体规格: 0.2ml
phospho-LSP1 (Ser252) 磷酸化白 F肌动蛋白结合蛋白抗体规格: 0.1ml
MAP3K2/MEKK2 丝裂原活化蛋白激酶激酶2抗体规格: 0.1ml
IFNA4/IFNA76/IFNA M1 干扰素α4抗体规格: 0.2ml
Ryanodine Receptor 心肌兰尼碱受体抗体（脑肌兰尼碱受体）规格: 0.2ml
GCMA/GCM1 绒毛膜特异性转录因子GCMa抗体规格: 0.2ml
Desmocollin 1 桥粒糖蛋白1抗体规格: 0.1ml
UACA 葡萄膜自身抗原Uaca抗体规格: 0.2ml
IL-6 白介素6抗体规格: 0.1ml
Caveolin-2 质膜微囊蛋白-2抗体规格: 0.1ml
AFP(A2) 甲胎蛋白单克隆抗体（包被）规格: 0.1ml
结肠癌细胞（低分化）；RKOVPC琼脂平板 GVPC Agar Plate 10个/包
DNA酶甲基绿琼脂基础 Dnase Agar Base with Methyl Green 100
香草乙酮（4-羟基-3-甲氧基苯乙酮） Acetovanillone（4-Hydroxy-3-methoxyacetophenone） 498-02-2 20mg
七叶苷培养基 Esculin Medium 10
5-羟基色氨酸 5-Hydroxytryptophan 4350-09-8 20mg
5-羟基马鞭草苷 Hastatoside 50816-24-5 10mg
50U BAL 31核酸酶 BAL 31 Nuclease -20℃保存
2 ug pRK2013 pRK2013 低温运输，-20℃保存
山柰酚-3-O-龙胆二糖苷 Kaempferol 3-O-gentiobioside 22149-35-5 5mg
碘液 2ml*20支
泛酸测定培养基 Pantothenic Acid Assay Medium 250g
10g 伊红 Y, 醇溶性 Eosin Y 室温阴凉干燥保存
100U Pfu DNA聚合酶 Pfu DNA Polymerase -20℃保存
- 温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
- 免责申明：以上内容为注册会员自行发布，若信息的真实性、合法性存在争议，平台将会监督协助处理，欢迎举报