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英文简称：NCI-H446细胞
产品名称：小细胞肺癌细胞；NCI-H446
货号：BJ-01X8550
规格：T25
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁/悬浮生长，混合
特征特性:该细胞是1982年由CarneyD和GazdarAF等从一位小细胞肺癌患者的胸腔积液中建立的。细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征。这个细胞株是小细胞肺癌的生化和形态学上的变种，表达神经元特有的烯醇酶和脑型肌酸激酶同工酶；多巴脱羧酶、蚕素、抗****、催产素或胃泌**释放肽未达到可检测水平。与正常细胞相比，该细胞CS-mycD
细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
实验要点及说明 :
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
培养操作:
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
phospho-RPS6KA1(Thr348) 磷酸化磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶p90RSK蛋白抗体规格: 0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser363) 磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶p90RSK蛋白抗体规格: 0.1ml
phospho-RPS6KA1(Ser352) 磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶p90RSK蛋白抗体规格: 0.1ml
VIP receptor 2/VPAC2 腺苷酸环化酶激活肽受体-II/血管活性肠肽受体-II抗体规格: 0.1ml
PACAP R1 腺苷酸环化酶激活肽受体1抗体规格: 0.1ml
PACAP-27/38 腺苷酸环化酶激活肽-27/38抗体规格: 0.1ml
PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38抗体规格: 0.1ml
PABP 多聚腺苷酸结合蛋白抗体规格: 0.1ml
PABP (Methyl Arg455/460) 甲基化多聚腺苷酸结合蛋白抗体规格: 0.1ml
PADI4 关节炎相关基因抗体规格: 0.2ml
PAF 血小板活化因子抗体规格: 0.1ml
PALB2 乳腺癌易感基因相关蛋白2规格: 0.1ml
PAFAH2/Lp-PLA2 脂蛋白磷脂酶A2抗体规格: 0.1ml
小细胞肺癌细胞；NCI-H446缓冲动力-硝酸盐培养基 Buffered Power - nitrate medium 250g
丁香树脂醇双葡萄糖苷 Syringaresinol-di-O-glucoside 66791-77-3 10mg
100mL 吐温 -80 Tween-80 室温密封保存
藁本内酯 Ligustilide 4431-01-0 20mg
R2A液体培养基 R2A Liquid Medium 250g
改良克氏双糖铁培养基 Modified KIA Iron Medium 250g
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂 用于副溶血性弧的生长试验。（SN0173-2010和GB/T4789.7-2008） 250g
50mL Calcium Chloride Solution（氯化钙溶液）, 1M Calcium Chloride Solution, 1M 常温保存
200 mL 小鼠白 分离液1.093 Cell Separation Solution -20℃保存
60µL 驴抗山羊IgG，辣根过氧化物酶标记 Donkey Anti-Goat IgG,HRP Conjugate -20℃保存
50T 甲型副伤寒沙门氏PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0 Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0 常温保存
芦丁（鉴别用纯度95%） Rutin 153-18-4 20mg
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