细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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英文简称：BEL-7402细胞
产品名称：肝癌细胞；BEL-7402
货号：BJ-01X8588
规格：T25
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
特征特性: BEL-7402细胞株是1974年从临床肝癌手术标本中建立的。 细胞群体倍增时间为20小时。 移植到处理过的wistar大鼠中的能形成肿瘤结节。 细胞形态呈上皮样细胞。 在电子显微镜下亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，与临床肝癌细胞相似。 分瓶培养第四天时，其有丝分裂指数约为7%。 BEL-7402细胞的染色体数为不足三倍体，有一个异常的近
实验要点及说明 :
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
培养操作:
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
VGLUT2 囊泡谷氨酸转运蛋白2抗体规格: 0.2ml
Phospho-BLNK(Tyr84) 磷酸化T 连接蛋白抗体规格: 0.1ml
Phospho-BLNK(Tyr491) 磷酸化T 连接蛋白抗体规格: 0.1ml
TWA1/C20orf11 20号染色体开放阅读框11抗体规格: 0.2ml
C20ORF141 20号染色体开放阅读框141抗体规格: 0.2ml
C20orf103 20号染色体开放阅读框103抗体规格: 0.2ml
C20orf111 过氧化氢诱导转录蛋白1抗体规格: 0.2ml
C20orf112 20号染色体开放阅读框112抗体规格: 0.2ml
C20orf132 20号染色体开放阅读框132抗体规格: 0.2ml
C20orf160 20号染色体开放阅读框160抗体规格: 0.2ml
KIZUNA/C20orf19 20号染色体开放阅读框19抗体规格: 0.2ml
C20orf194 20号染色体开放阅读框194抗体规格: 0.2ml
C20orf195 20号染色体开放阅读框195抗体规格: 0.2ml
肝癌细胞；BEL-7402250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH6.5 Phosphate Buffer，0.5M, pH6.5 常温保存
检定培养基5号 供两性霉素B检定种啤酒酵母培养用（中华人民共和国药典2010版）。 100g
250mL Tris-Acetate Buffer,1M,pH8.5 Tris-Acetate Buffer,1M,pH8.5 常温保存
2 ug pOTB7 TOMM70A pOTB7 TOMM70A 低温运输，-20℃保存
25mg 萘酚 AS-TR 磷酸盐 Naphthol AS-TR Phosphate Disodium Salt -20℃保存
李氏增肉汤LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包
2 ug pcDNA5 FRT pcDNA5 FRT 低温运输，-20℃保存
100mL 分离液A型（人） Lymphocyte Separation Solution A 4℃保存
精氨酸支原体肉汤培养基 Arginine Mycoplasma Broth Meium 250g
5mL MgSO4溶液，10mM，PCR级 MgSO4 ，PCR Grade -20℃保存
亚利桑那琼脂（SA） 用于亚利桑那选择性分离培养。（SN 0170-92） 100g
10g 植酸钠 Phytic Acid Sodium Salt Hydrate 室温阴凉保存
2 ug pTrcCKS pTrcCKS 低温运输，-20℃保存
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