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英文简称：MCF10A细胞
产品名称：正常乳腺上皮细胞；MCF10A
货号：BJ-01X8726
规格：T25
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
特征特性:
培养条件:DMEM/F12+5%HS+EGF20ng/ml+hydrocortisone0.5ug/ml+choleratoxin霍乱霉素100ng/ml+insulin胰岛素10ug/ml+1%P/S 推荐乳腺上皮细胞专用培养基
传代方法:1：2传代
细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
实验要点及说明 :
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
培养操作:
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
ADAMTS7(NT) 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 (N端抗体) 0.1ml
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1 肿瘤/睾丸抗原1B 0.2ml
ADAMTS8 整合素样金属蛋白酶与凝血酶8型抗体 0.2ml
PRRSV M protein 猪蓝耳病病毒M蛋白抗体 1ml
CPN10 叶绿体伴侣蛋白抗体（苹果） 1ml
FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病毒 0.2ml
Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) 盐酸克仑特罗/瘦肉精抗体 0.1ml
Chloramphenicol 氯霉素抗体 0.2ml
ADAR1 (N-terminus) 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端） 0.2ml
BRLF1 立即早期癌基因BRLF1抗体（鼻咽癌基因） 0.2ml
ADAR1 (C-terminus) 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端） 0.2ml
Ractopamine /PAYLEAN (1B12) 小鼠抗莱克多巴胺单克隆抗体 0.2ml
Cellulase 纤维素酶 1ml
正常乳腺上皮细胞；MCF10A松三糖 细生化鉴定 20支/盒
500 mL MEM培养基（含1%双抗） Cell Culture Medium -20℃保存
50U T4 DNA 聚合酶 T4 DNA Polymerase -20℃保存
邻单胞鉴别琼脂 250g
1g 多聚半乳糖醛酸钠盐 Polygalacturonic Acid Sodium Salt 室温保存
5g 3- 氨基 -9- 乙基咔唑 AEC (3-Amino-9-Ethylcarbazole) 常温保存
100mL PEG 3350 Solution,50% PEG 3350 Solution,50% 常温保存
50T 肠道病毒EV71/柯萨奇病毒A16型2联PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
50支 DNA样品采样拭子 DNA Sample Swab 常温
氧化白藜芦醇 Oxyresveratrol 29700-22-9 20mg
0.1mL×10 Origami (DE3)感受态 Origami (DE3) Competent Cell -80℃保存
肉汤培养基(测磷细数) 250g
2 ug pGCsi/H1/Neo/GFP Survivin pGCsi/H1/Neo/GFP Survivin 低温运输，-20℃保存
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