原代细胞分离：
一、细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从干扰组细胞数大于对照组的事实说明可促进细胞增殖的结论。所以直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。
四、细胞周期检测技术
细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。
五、细胞凋亡检测
常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，Hoechst染色，电镜，TUNEL。
订购信息：
英文简称：INS-1细胞
产品名称：大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1
货号：BJ-01X8923
规格：T25
形态特性:不规则，多角
生长特性:贴壁生长
特征特性:该细胞源自X射线照射的移植胰岛瘤的大鼠，胰岛素阳性，可合成胰岛素原I和II，可用于beta细胞功能研究。
培养条件:RPMI1640 + 10%FBS+50 μmol/L 2－巯基乙醇+0.11g/L的丙酮酸钠
传代方法:1:3～1:6传代，每周换液2～3次
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养���后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库各地均可发货，统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
HDDC3 四磷酸鸟苷水解酶抗体规格: 0.2ml
PLEKHM1 石骨症相关蛋白PLEKHM1抗体规格: 0.2ml
PLEKHM2/SKIP 血小板白 C激酶底物同源结构域M2抗体规格: 0.2ml
PLEKHM3 血小板白 C激酶底物同源结构域M3抗体规格: 0.2ml
PID1 磷酸相互作用结构域蛋白1抗体规格: 0.2ml
beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉样肽1-40(C端)抗体规格: 0.1ml
SRRM1 丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白1抗体规格: 0.2ml
SRRM2 丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白2抗体规格: 0.2ml
SRRM3 丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白3抗体规格: 0.2ml
beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉样肽 1-40（C端）抗体规格: 0.1ml
SRRM4 丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白4抗体规格: 0.2ml
ADCK4 ADCK4蛋白抗体规格: 0.2ml
ADCK3/CABC1 伴侣蛋白bc1同源复合体抗体规格: 0.2ml
大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-125mL LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) 常温保存
2 ug pBAD/gIII B pBAD/gIII B 低温运输，-20℃保存
96支 200μLRNase-free黄吸头(盒装已灭带芯) 常温
胆盐乳糖颗粒培养基 用于药品中大肠杆和绿脓杆的增培养 10袋(300mL配量/袋)
2 ug pHT304 pHT304 低温运输，-20℃保存
1mg 松弛素 B Cytochalasin B -20℃保存
5g 3- 苯甲酰丙酸 3-Benzoylpropionic Acid 室温保存
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素,(mLST-Vm)颗粒 Modified Lauryl Sulfate Tryptose Broth- Vancomycin 300ml/袋*10
2 ug pJQ200SK pJQ200SK 低温运输，-20℃保存
100U Klenow 片段
2 ug pcDNA3.1/Hygro（+） pcDNA3.1/Hygro（+） 低温运输，-20℃保存
50T 凋亡抑制蛋白Livin基因PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
250mg 激动素 Kinetin 室温保存
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