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英文简称:KASUMI-1细胞
产品名称:红白血病细胞
货号:BJ-01X9068
规格:T25
形态特性: 原粒细胞
生长特性:悬浮生长
特征特性:
培养条件:RPMI-1640+20%FBS
传代方法: 1:2。3天内可长满。
细胞传代步骤:
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/Cy3 Cy3标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/Cy5 Cy5标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/Cy7 Cy7标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE PE标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/APC APC标记的小鼠抗人IgG规格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/FITC FITC标记的小鼠抗人IgG规格: 0.3ml
红白血病细胞 20次 即用型长片段PCR试剂盒 Instant Long PCR Mix -20℃保存
1瓶 B16F1 株 B16F1 低温运输和保存
2 g Sodium orthovanadate (磷酸酯酶抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷 (-)-Syringaresnol-4-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside 136997-64-3 20mg
50次 脂蛋白纯化试剂盒
2 ug pcGlobin2-Cre pcGlobin2-Cre 低温运输,-20℃保存
1瓶 C918 株 C918 低温运输和保存
25g L- 精氨酸 L-Arginine 室温保存
1瓶 L Wnt-3A 株 L Wnt-3A 低温运输和保存
50T 驴特定基因序列PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
1mL RNA Sample Buffer (without EB) RNA Sample Buffer (without EB) 常温保存
10次 DNA Shuffing试剂盒 DNA Shuffling Kit -20℃保存
巧克力平板培养基(双抗) 添加万古霉素和多粘素,用于分离奈瑟氏、流感嗜血等。 90mmX20个
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