小鼠肺泡上皮细胞 MLE-12

我司全程提供细胞生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、组织、冻存条件等复苏及冻存细胞株说明书信息，我们专业您的细胞系实验，让您实验再无烦扰！

英文简称：MLE-12细胞

产品名称：小鼠肺泡上皮细胞 MLE-12

货号：BJ-01X9586

规格：T25

形态特性:上皮样 多角

生长特性:贴壁生长

特征特性:组织来源于正常小鼠肺组织。 （1） 产生、分泌并再利用肺表面活性物质。 （2） 含Na+-K+-ATP酶和Na+通道，调节肺 Na+传递。 （3） 维持着肺液体内环境稳定平衡。

培养条件:DMEM/F12+10%FBS

传代方法: 1:2传代

细胞传代步骤： 
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

实验要点及说明 :

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

培养操作:

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

3’末端RNA探针同位素（[32P]pCp）连接酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

3’末端RNA探针同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

随机引物DNA探针同位素（[α32P]dCTP）聚合酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

3’末端DNA探针同位素（[α32P]dATP）聚合酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

3’末端DNA探针同位素（[α32P]dCTP）聚合酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

3’末端DNA探针同位素（[α32P]dATP）转移酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

DNA末端平滑补缺同位素（[35S]dATP）聚合酶标记试剂盒 进口/国产 规格：20次

三联重复子延展度同位素（[γ32P]ATP）激酶标记法检测试剂盒 进口/国产 规格：10次

同位素[α32P]dCTP聚合酶标记微卫星扩增试剂盒 进口/国产 规格：20次

同位素[γ32P]ATP激酶标记微卫星扩增试剂盒 进口/国产 规格：20次

同位素标记放射活性TCA检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

随机引物DNA探针同位素标记产物完全双链制备试剂盒 进口/国产 规格：20次

同位素标记放射活性滤膜法检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

小鼠肺泡上皮细胞 MLE-121次 一步法96孔板单落质粒DNAout（离心法） One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常温　　1g 溴甲酚绿 Bromocresol Green Sodium Salt 室温保存

5次 一步法97孔板单落质粒DNAout（离心法） One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常温　　5g 溴甲酚紫 Bromocresol Purple 室温保存

1次 一步法96孔板单落质粒DNAout（真空法）  　　5g 溴酚蓝 Bromophenol Blue 室温干燥保存

10mL 一步式广谱DNAout Magic DNAOUT 常温　　1g 丁酸钠 Butyric Acid Sodium Salt 室温干燥保存

50次 微量样品核酸提取试剂盒 Tiny Sample DNA-RNAOUT 4℃保存　　5g 二甲基砷酸钠 Cacodylic Acid Sodium Salt 室温干燥保存

200次 微量样品核酸提取试剂盒 Tiny Sample DNA-RNAOUT 4℃保存　　100g 氯化钙，二水 Calcium Chloride, Dihydrate 室温干燥保存

50次 液体样品DNAout Liquid Sample DNAOUT 常温（溶液A和溶液D需要4℃保存）　　1mg 钙离子载体 Calcium Ionophore A23187 室温避光保存

100次 液相内剂 Solution Endotoxin Erasol 溶液B和溶液C室温保存　　100mL 加拿大树胶 Canada Balsam 室温避光保存

500次 液相内剂 Solution Endotoxin Erasol 4℃保存　　10g 3-(环己胺)-1-丙磺酸 CAPS 室温干燥保存

100g 固相内剂 Surface Endotoxin Erasol 常温　　1g  Carbenicillin Disodium Salt 4℃保存

500g 固相内剂 Surface Endotoxin Erasol 常温　　25mg 6- 羧基二乙酸荧光素 6-Carboxyflucrescein Diacetate -20℃保存

1.5mL 柱式内剂 Column Endotoxin Erasol 4℃保存　　25g 羧甲基纤维素钠盐 Carboxymethylcellulose Sodium Salt 常温保存

5mL 内专用亲和介质 Endotoxin Removal Resin 4℃保存　　1g 洋红 Carmine 室温干燥避光保存

产品留言

标题

联系人

联系电话

内容

验证码

点击换一张

注：1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!