牛主动脉内皮细胞

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

我司全程提供细胞生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、组织、冻存条件等复苏及冻存细胞株说明书信息，我们专业您的细胞系实验，让您实验再无烦扰！

英文简称：BAEC细胞

产品名称：牛主动脉内皮细胞

货号：BJ-01X10048

规格：主动脉；内皮细胞

形态特性:1640

生长特性:贴壁

细胞传代步骤： 
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

实验要点及说明 :

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

培养操作:

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/Bio  生物素标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.3ml

Goat Anti-rat IgG/AP  碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/Gold  胶体金标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.5ml

Goat Anti-rat IgG/FITC  FITC标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.3ml

Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG规格: 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗豚鼠IgG规格: 0.3ml

牛主动脉内皮细胞1g 3,3’- 二氨基联苯胺四盐酸 DAB HCl -20℃保存　　2 ug pLNHX pLNHX 低温运输，-20℃保存

10mg 4’,6- 二脒基 -2- 苯基吲哚 DAPI   -20℃避光保存　　2 ug pLOX-CWBmi1 pLOX-CWBmi1 低温运输，-20℃保存

25g N,N,- 二环已基碳化二亚胺 DCC(N,N,-Dicylohexylcarbodiimide)                      室温保存　　2 ug pAdTrack-CMV pAdTrack-CMV 低温运输，-20℃保存

100g DEAE 纤维素 DEAE Cellulose 室温干燥保存　　2 ug pLOX-CW-CRE pLOX-CW-CRE 低温运输，-20℃保存

25g DEAE葡聚糖凝胶 A-25 DEAE-Sephadex A-25 -20℃保存　　2 ug pLOX-gfp-iresTK pLOX-gfp-iresTK 低温运输，-20℃保存

25g DEAE葡聚糖凝胶 A-50 DEAE-Sephadex A-50 室温保存　　2 ug pLOX-TERT-iresTK pLOX-TERT-iresTK 低温运输，-20℃保存

25mL DEAE琼脂糖凝胶 6B DEAE-Sepharose CL-6B 4℃保存　　2 ug pLOX-Ttag-iresTK pLOX-Ttag-iresTK 低温运输，-20℃保存

25mL 快流速 DEAE- 琼脂糖凝胶 DEAE-Sepharose Fast Flow 4℃保存　　2 ug pLP VSV-G pLP VSV-G 低温运输，-20℃保存

10g 脱氧胆酸 Deoxycholic Acid  室温干燥保存　　2 ug pLP1 pLP1 低温运输，-20℃保存

10g 脱氧胆酸钠 Deoxycholic Acid，Sodium Salt                室温干燥保存　　2 ug pLP2 pLP2 低温运输，-20℃保存

50mg 小牛胸腺 DNA Deoxyribonucleic Acid Sodium Salt From Calf Thymus  4℃保存　　2 ug pLPCX pLPCX 低温运输，-20℃保存

100mg 鲑鱼精 DNA Deoxyribonucleic Acid Sodium Salt From Salmon Testes 4℃保存　　2 ug pLV-EBFP2-nuc pLV-EBFP2-nuc 低温运输，-20℃保存

25mg 脱氧核糖核酸酶 ( 牛胰 ) DNase I ( DeoxyribonucleaseⅠ) -20℃保存　　2 ug pLV-aMHC GFP pLV-aMHC GFP 低温运输，-20℃保存

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