使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
订购信息：
产品名称：产气肠杆菌PCR实验试剂
英文名称：Enterobacter aerogenesPCR
货号：BJ-01R3581
产品规格：50T
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：现货
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】：
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
u 运输：采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。
本公司产品仅用于科研。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。
组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
H-Ala-Arg-OH 10g Propiverine N-oxide (hydrochloride) 25g ACTH (1-10) (human, mouse, rat, porcine, bovine, ovine) (trifluoroacetate salt) 5mg
25P-NBOMe (hydrochloride) 25mg Adipic acid 50mg Fmoc-Ser(tBu)-Thr(Psi(Me,Me)pro)-OH 10mg
Anakinra 1mg Sarafotoxin S6b 5g APOE4 Human 2μg
WEHI-345 analog 1g E-3810 500μg GREM1 Human 5mg
Glycolithocholic Acid (sodium salt) 25mg Nialamide 50mg Picfeltarraenin IA 1mg
Omadacycline mesylate 2μg (S)-IDO1-IN-5 1mg 5-trans Latanoprost (free acid) 50mg
Perisesaccharide B 10mg MK-0941 5μg BB-22 3-carboxyindole metabolite 10mM*1mLinDMSO
p38 MAPK-IN-1 25g Chlamydia HSP70 (549-660a.a.) 1mg Solithromycin 50mg
KRT17 Human 10mg CARD17 Human 10mg Berberine chloride hydrate 50mg
Alkaline Phosphatase Bovine 50mg (S)-(+)-Eicosapentaenyl-2’-Hydroxy-1’-Propylamide 1g 2,3-Dimethoxy-5-methyl-p-benzoquinone 5mg
Neuropeptide W-23 (human) (trifluoroacetate salt) 25mg TPMT Human 10mg HBV X 1mg
ENOPH1 Human 25mg DBHDA 25g ELN 318463 racemate 20μg
Borrelia Spielmanii OspC 5mg SLx-2119 5mg Coprostanol 1μg
Bromodiphenhydramine (hydrochloride) 1mg Cediranib maleate (AZD-2171 maleate) 25mg Ro 67-4853 100mg
Prednicarbate 10μg Pipequaline (PK-8165) 50mg βARK1 Inhibitor 1mg
产气肠杆菌PCR实验试剂2甲4氯 标准品 CAS号：94-74-6 250MG 英文名称 含量： 20mg/支 C18orf1 18号染色体开放阅读框1抗体规格: 0.2ml
2甲4氯丁酸 标准品 CAS号：94-81-5 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 RBFA 核糖体结合因子RBFA抗体规格: 0.2ml
甲苯咪唑 标准品 CAS号：31431-39-7 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 Apg12 自噬相关蛋白12抗体规格: 0.2ml
灭蚜磷 标准品 CAS号：2595-54-2 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 pan 14-3-3 14-3-3蛋白抗体规格: 0.2ml
2甲4氯丙酸 标准品 CAS号：7085-19-0 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 ATG13 自噬相关蛋白13抗体规格: 0.2ml
吡咯二酸二乙酯 标准品 CAS号：135590-91-9 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶规格: 0.2ml
甲烯雌醇乙酸酯 标准品 CAS号：2919-66-6 100MG 英文名称 含量： 20mg/支 RIMKLA/FAM80A 核糖体蛋白S6修饰样蛋白A抗体规格: 0.2ml
嘧 胺标准品 CAS号： 110235-47-7 100mg 英文名称 含量： 20mg/支 FAM78A/C9orf59 9号染色体开放阅读框抗体规格: 0.2ml
缩节胺 标准品 CAS号：24307-26-4 100mg 英文名称 含量： 20mg/支 FAM78B FAM78B蛋白抗体规格: 0.2ml
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