原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
产品货号
P-X1698
产品规格
5×105
组织来源
脑动脉组织
生长特性
贴壁
细胞形态
内皮细胞样
产品类别
大鼠原代细胞
传代特性
可传2-3代
用途
仅供科研
细胞简介:
大鼠脑动脉血管内皮细胞分离自脑动脉组织;脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环;静脉系多不与同名动脉拌行,所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉;各级静脉都没有瓣膜,它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。脑动脉血管内皮细胞主要功能:①维持血管内外的动态平衡;②合成和分泌细胞因子和介质;③维持凝血和纤溶的动态平衡。
方法简介:
公司实验室分离的大鼠脑动脉血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并通过内皮细胞培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
公司实验室分离的大鼠脑动脉血管内皮细胞经CD31荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
包被条件 PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 内皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
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注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。