原代细胞实验步骤：
以胚胎小鼠为例 1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2．用Hanks液洗涤3次，剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。 4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。 注：细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。 5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4~5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。
组织来源
肺组织
货号
P-X1259
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
人原代细胞
细胞形态
成纤维细胞样
细胞简介：
人肺成纤维细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
方法简介：
公司实验室分离的人肺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
公司实验室分离的人肺成纤维细胞经Vimentin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
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注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。