原代细胞实验步骤：
以胚胎小鼠为例 1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2．用Hanks液洗涤3次，剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。 4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。 注：细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。 5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4~5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。
产品货号
P-X2057
产品规格
5×105
组织来源
结肠
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
产品类别
兔原代细胞
传代特性
可传3代左右
用途
仅供科研
细胞简介：
兔结肠成纤维细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的结肠成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介：
实验室分离的兔结肠成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
实验室分离的兔结肠成纤维细胞经Vimentin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
相关产品：
兔脂肪细胞 Rabbit primary adipocytes
抗补体I因子小鼠杂交瘤细胞；14D3
小鼠DRG神经元细胞 Mouse primary DRG neuronal cells
小鼠肾小球系膜细胞；SV40 MES 13
Hela 299 (人宫颈癌细胞)
人牙周膜成纤维细胞
人颈上皮细胞
人牙龈上皮细胞
Sp2/0-Ag14[SP2/0] (小鼠骨髓瘤细胞) (种属鉴定正确)
小鼠杂交瘤细胞；4D1
鼠源杂交瘤细胞；AV2G1
FOXN4
人泛素激活酶(E1/UBAE)elisa分析检测试剂盒
SELP ELISA kit
Gm13152
犬P选择素(SELP)elisa分析检测试剂盒
Gm13152蛋白抗体
丝氨酸棕榈酰转移酶2抗体 Anti-SPTLC2
NFYC
FOXN4蛋白抗体
核转录因子YC抗体
Goat Anti-Human IgM / APC
E1/UBAEELISAKit
APC标记的羊抗人IgM
小鼠花生四烯酸(AA)elisa分析检测试剂盒
尿卟啉原脱羧酶抗体 Anti-UROD
LMA ELISA Kit
细胞周期蛋白依赖性激酶5激活因子1抗体 Anti-p35/CDK5P1
猴抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa分析检测试剂盒
猪繁殖与呼吸综合征/猪蓝耳病抗体 Anti-PRRSV
AAELISAKit
真核翻译起始因子3亚基L/eIF3e蛋白抗体
小鼠弹性蛋白(ELN)elisa检测试剂盒
PPT2
白细胞介素37抗体
棕榈酰蛋白水解酶2抗体
IF3EI
核黄素转运因子1(RFT1)elisa检测试剂盒
IL-37
肝素（heperin）活性比色法定量检测试剂盒
磷酸二酯酶7B（Phosphodiesterase 7B）
1号染色体开放阅读框222抗体
兔结肠成纤维细胞C1orf222
注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。