原代细胞实验步骤：
以胚胎小鼠为例 1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2．用Hanks液洗涤3次，剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。 4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。 注：细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。 5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4~5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。
产品货号
P-X2104
产品规格
5×105
组织来源
胸腺
生长特性
贴壁
细胞形态
上皮细胞样
产品类别
兔原代细胞
传代特性
可传1-2代
用途
仅供科研
细胞简介：
兔胸腺上皮细胞分离自胸腺组织；胸腺是机体重要的器官，其功能与紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，还可以分泌胸腺及类物质，具有技能的器官。胸腺上皮细胞和胸腺细胞是胸腺微环境的重要组成部分，其外，胸腺上皮细胞组成了胸腺细胞不同发育阶段的三维结构，根据其在胸腺中位置不同，可分为皮质胸腺上皮细胞和髓质胸腺上皮细胞。胸腺细胞的发育和成熟是通过在胸腺皮质和髓质上皮细胞的迁移过程中相互作用完成的。此外，胸腺细胞通过皮质胸腺上皮细胞介导的阳性选择和髓质胸腺上皮细胞介导的阴性选择发育为能够识别和耐受自身主要组织相容复合体和自身抗原的成熟T细胞。胸腺上皮细胞是构成胸腺微环境的主要成份，其形态、分布和功能多样。表面抗原表达具有高度异质性，与胸腺细胞结合成不同类型复合体，部分胸腺上皮细胞相互排列构成囊泡样结构。电镜观察，可把胸腺上皮细胞分为3-6型，用抗胸腺上皮细胞单克隆抗体荧光染色可把胸腺上皮细胞分为9种类型。
方法简介：
实验室分离的兔胸腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
实验室分离的兔胸腺上皮细胞经PCK荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
传代特性：可传1-2代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
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注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。