组织来源
嗅球
货号
P-X2212
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
兔原代细胞
细胞形态
神经元、上皮细胞样
细胞简介:
兔嗅鞘细胞分离自嗅球组织;嗅鞘细胞(OECs)是在功能上介于施旺细胞和少突胶质细胞之间的一种特殊的胶质细胞,具有神经营养、抑制胶质、瘢痕形成、成鞘作用等;为轴突生长提供了适宜的微环境及较强的迁移的特性,使其成为促进神经的理想候选细胞之一。嗅鞘细胞是目前所发现的极少数的神经系统可以细胞之一,其特点为终身具有神经功能,还能够释放多种神经营养因子、神经粘附分子。被认为是髓鞘化能力强的胶质细胞,逐渐用于脊髓损伤。嗅鞘细胞与胶质细胞、雪旺细胞在表现型上有共同点,它们都能促进轴突的,主要区别在于嗅鞘细胞不但存在于神经系统,也存在于外周神经中。嗅鞘细胞被认为是一种可塑性很高的细胞,它可表现出多种细胞形态和细胞表面标志,在嗅系统发育过程中,嗅鞘细胞根据其在组织定位的不同而有不同的抗原表型,其中P75NTR、GFAP、和O4可标记大部分在体嗅鞘细胞,然而在嗅球外神经层O4阳性嗅鞘细胞仍然可以在P75NTR阳性细胞层内分化成E-NCAM阳性的细胞层,还有一定比率的嗅鞘细胞P75NTR阴性而NY和S100表型为阳性。嗅黏膜中的神经元是生后才生长并在成年时继续分化的神经元,寿命为4-12周,随着新细胞的生长,又建立了新的神经支配关系。嗅鞘细胞存在于嗅神经及嗅球的神经层上,沿嗅神经的全长,从周围神经系统到神经分布。
实验室分离的兔嗅鞘细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法、结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
实验室分离的兔嗅鞘细胞经GFAP荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
包被条件:PLL(0.1mg/ml)
培养基:含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:神经元、上皮细胞样
传代特性:可传1代,不建议传代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
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原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
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