原代细胞实验步骤：
以胚胎小鼠为例 1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2．用Hanks液洗涤3次，剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。 4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。 注：细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。 5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4~5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。
组织来源
支气管
货号
P-X2013
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
兔原代细胞
细胞形态
上皮细胞样
细胞简介：
兔支气管上皮细胞分离自支气管组织；支气管（Bronchi），是指由气管分出的各级分枝，由气管分出的**支气管，即左、右主支气管。左主支气管与右主支气管相比较，前者较细长，走向倾斜；后者较粗短，走向较前者略直，所以经气管堕入的异物多进入右主支气管。支气管和气管还有以区别就是，气管是以“C”型的气管软骨为支架，而支气管不是。支气管上皮是气道与外界环境接触的道防线，不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子，从而参与气道炎症及反应。支气管上皮细胞在**、慢性阻塞性肺、肺癌、肺囊性纤维化以及一些感染性呼吸道的发病机制中均起着重要的作用。体外培养的原代支气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，因此，在基础及临床研究中极为重要。
方法简介：
实验室分离的兔支气管上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合机械刮刷并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
实验室分离的兔支气管上皮细胞经PCK荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
传代特性：可传1-2代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
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注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。