原代细胞实验步骤：
以胚胎小鼠为例 1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2．用Hanks液洗涤3次，剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3．用弯头剪把胚胎尽量剪碎，每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行，即消化法和组织块培养法。 4．若使用消化法，则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶中培养。 注：细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。 5．若进行组织块培养，则不做步骤4，加入几滴血清于组织块中，再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开，注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2－3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来，从边角加入4~5mL培养基，使细胞接触到培养基，放培养箱内继续进行培养。
组织来源
海绵体组织
货号
P-X1869
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
小鼠原代细胞
细胞形态
成纤维细胞样
细胞简介：
小鼠海绵体平滑肌细胞分离自海绵体组织；海绵体，又称海绵体肌，是硬的平滑肌和结缔组织。海绵体是一种勃起组织，外面包有坚厚的白膜，内部由结缔组织和平滑肌组成海绵状支架，其腔隙与血管相通。它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中，在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。因此可用胶原酶分离出海绵体平滑肌细胞。平滑肌，是非横纹肌的肌肉组织。分布在人体动脉和静脉血管壁、膀胱、、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫状肌和虹膜。平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。
方法简介：
公司实验室分离的小鼠海绵体平滑肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
公司实验室分离的小鼠海绵体平滑肌细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传1-3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
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注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。