原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
产品货号
P-X1916
产品规格
5×105
组织来源
脂肪组织
生长特性
贴壁
细胞形态
梭形、多角形
产品类别
小鼠原代细胞
传代特性
属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群
用途
仅供科研
细胞简介:
小鼠脂肪细胞分离自脂肪组织;脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成,聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶;贮存的脂肪,在需要时可迅速分解成甘油和脂肪酸,经血液输送到各组织以供利用。它们影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应,参与多种重要病理生理过程;脂肪组织已由过去单纯作为能量储存的器官而成为一个极其重要的系统。脂肪细胞分为白色脂肪细胞和褐色(棕色)脂肪细胞,常呈白色,在婴幼儿期大量增殖,到青春期数量达到,此后数量一般不再增加。细胞内含有大量富含脂肪的小泡,称为脂质泡,富含光面内质网。此外,还有一种褐色脂肪细胞,在动物体内主要存在于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围,含有高度团缩的褐色脂肪,作用是将脂质分解产热,调节体内脂质比例。
方法简介:
公司实验室分离的小鼠脂肪细胞采用胰蛋白酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
公司实验室分离的小鼠脂肪细胞经油红O染色检测,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
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注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。