原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
组织来源
羊的正常睾丸组织
货号
P-X2298
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
羊原代细胞
细胞形态
不规则细胞
细胞详述:
睾丸间质细胞成群分布在曲精小管之间,胞体呈圆形,椭圆形或不规则形,胞体较大,直径约 20μm,胞质呈嗜酸性,细胞核呈圆形或卵圆形,常位于中央,染色较淡,有1~2个核仁线粒体多,呈管嵴状,无分泌颗粒。睾丸支持细胞是存在于雄性睾丸间质中的主要细胞类型,其主要功能是分泌和合成睾丸酮,睾丸酮在刺激精子发生、精子成熟及性功能的维持等方面具有重要作用。目前,以睾丸支持细胞为靶向的研究备受关注。体外培养的睾丸支持细胞能直接反应对该细胞作用的特点,使分离纯化睾丸支持细胞成为必要的前提条件。
细胞特性:
1)组织来源于羊的正常睾丸组织。
2)细胞鉴定:3β-HSD荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式:梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
我们推荐使用 DELF 原代 间质 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。
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注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。