原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
小鼠胃黏膜成纤维细胞
组织来源
小鼠的正常胃组织
货号
P-X1823
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
小鼠原代细胞
细胞形态
贴壁培养
细胞详述:
胃壁一般由 3 层组织构成,内层是粘膜层,外层是浆膜层 ,中间是由平滑肌组成的肌层 。成纤维细胞是结缔组织中常见的细胞,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。
成纤维细胞的主要功能之一是合成胶原蛋白及其他细胞外基质,在组织器官纤维化过程中发挥重要作用。
细胞特性:
1) 组织来源于实验动物小鼠的正常胃组织。
2) 细胞鉴定: 纤维连接蛋白( Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)荧光
染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于 90 %。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5) 细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
我们推荐使用 DELF原代成纤维细胞培养体系 作为该细胞的培养基。
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注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。