原代细胞实验步骤:
以胚胎小鼠为例 1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的器械。后取出双角置于无菌平皿内。 2.用Hanks液洗涤3次,剪开取出胚胎。血液和筋膜等组织。 3.用弯头剪把胚胎尽量剪碎,每个组织块小于1mm3。在操作时应尽量将平皿盖半盖住平皿以防空气中尘埃落下污染组织。再用Hanks液洗涤2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按两种方法进行,即消化法和组织块培养法。 4.若使用消化法,则将组织块放人三角烧瓶内加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力搅拌消化20多min。然后加入少量血清终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,800r/min离心5~10min收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶中培养。 注:细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等)。 5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
大鼠肠粘膜上皮细胞
组织来源
肠道组织
货号
P-X1585
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
大鼠原代细胞
细胞形态
不规则细胞
细胞详述:
肠指的是从胃幽门至的消化管。肠是消化管中长的一段,也是功能重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。
肠壁结构一般分4层,由外向内依次为:浆膜层,平滑肌层,粘膜下层和粘膜层。粘膜层又分为3层:靠近粘膜下层的是一层平滑肌,称为粘膜肌层。其次为结缔组织,又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜。小肠粘膜有纵行和横行皱襞,并有无数细小的指状突起,称为绒毛。绒毛的基底处粘膜内陷成管状,称为利贝屈恩氏隐窝。
隐窝基底部的上皮细胞不断地进行有丝分裂,产生新细胞。隐窝上皮中还有许多杯状细胞,它分泌粘液,起滑润食物和保护粘膜的作用。大肠内无绒毛,其大部分上皮细胞分泌粘液。直肠的上皮细胞也分泌粘液。
细胞特性:
1)来源:肠道组织
2)含量:>5x105 个/mL
3)鉴定:角蛋白(PCK)荧光染色法
4)纯度:>85%
5)污染:支原体、、酵母和检测为阴性
6)规格:1mL冻存管包装
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注意事项:
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。