介绍几种二抗探针的优缺点及其适用的实验:
酶:
主要有两种不同的酶耦联物,HRP和AP。比较而言,前者更经济、快速、稳定,而后者较前者更为灵敏,通常情况下,HRP广泛应用于免yi 组化,western blot和ELISA中,而碱性磷酸酶(AP)更适合于固相的免yi 检测实验,如ELISA和western blot.
荧光基团:
FITC:FITC是广泛使用的荧光基团,但其*大的缺点是淬灭快,使用抗淬灭剂可以减轻。
AMCA:常用在多标记实验中,如免yi 荧光、流式细胞术。其缺点是,淬灭快,且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光,因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。
花青染料(Cy2,Cy3,Cy5):Cy2比FITC更稳定,且在表面荧光显微镜下,Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮,更稳定,背景更弱。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察,因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。
TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中,也可以使用RRX或TR,但TR会产生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间,且和这两者的重叠很少。
PE:常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。