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PCR反应无扩增条带结果分析
PCR反应无扩增条带结果分析:
1、
酶失活或在反应体系中未加入酶。
Taq DNA
聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
2、
模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成
DNA
脱嘌呤而影响
PCR
的结果。
3、
变性温度是否准确:
PCR
仪指示温度与实际温度是否相符,过高酶在前几个循环就迅速失活;过低则模板变性不彻底。
4、
反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加
Taq
酶以前,将反应体系
95
℃加热
5-10 min
。
5、
引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。
6、
引物错误。利用
BLAST
检查引物特异性或重新设计引物。
7、 DNA
凝胶电泳时加入阳性对照,确保不是
DNA
凝胶和
PCR
程序的问题。
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