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免 疫荧光(IF)样本准备要求

   免 疫荧光(immunofluorescence,IF),通常是指用荧光标记的抗体示踪或检查样品中相应抗原的方法。根据抗原抗体反应,将不影响抗原抗体相互作用的荧光分子标记在抗体上,与其相应的抗原反应后,在荧光显微镜下针对荧光标记分子的激发光发射光进行观察,从而检测目的指标的相对含量、在组织细胞中的定位。
样本准备要求:
1、取材手法:要求取材器械锋利,尽可能选择薄的手术刀片,减少剪刀的使用,避免挤压挫伤标本。较准确地取到目的部位组织,夹取标本的时候尽量远离目的区域组织。
2、取材速度:尽量保证样本离体后5min内放入到合适的固定液内。如果一只动物同时取多种器官,优先取消化器官,其次取中 枢神经系统器官(脑,脊髓等),皮肤、肌肉等可放到后取。
3、组织块大小:未经灌注的标本组织厚度不要超过1cm。
4、固定液:针对不同的标本特点及实验目的一定要选用正确的固定液。
5、固定液量:固定液体积为组织的10倍,且组织能在容器内自由移动,不贴壁不沉底,并做好清晰标记。
6、固定温度:常温即可,无需冷藏,切勿冷冻结冰,否则固定液结冰形成冰晶严重破坏组织形态结构。