基本原理
将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细jun、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免yi病理检查。
试剂与仪器
磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L，pH7.4
荧光标记的抗体溶液:以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释
缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
搪瓷桶三只(内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml)
有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
荧光显微镜
玻片架
滤纸
37℃温箱等。
实验步骤
① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。
② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间(参考:30min)。
③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。
④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。
⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用"+"表示:
(-)无荧光;(±)极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱，但清楚可见;(++)荧光明亮;(+++ --++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达"++"以上，而各种对照显示为(±)或(-)，即可判定为阳性。
注意事项
1)对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1:20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。
2)染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。染色温度多采用室温(25℃左右)，高于37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎病毒)可采用0-2℃的低温，延长染色时间。低温染色过夜较37℃30 min效果好的多。
3)为了保证荧光染色的正确性，首ci 试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。
① 标本自发荧光对照:标本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。
② 特异性对照(抑制试验):标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。
③ 阳性对照:已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。
如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光，阳性对照和待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。
4)一般标本在高压汞灯下照射超过3min，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本*好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。