细胞传代的操作步骤:
1、挑选细胞:镜检细胞,挑选生长状态良好,细胞界限清晰,具有立体感,形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。
2、配制细胞培养液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,加入灭活小牛血清10m1,庆大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。
3、消化细胞:先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液完全覆盖细胞表面。
4、至细胞完全脱落到胰酶中:每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。
5、加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片(由细胞接种浓度决定)。
6、填写传代记录。