在我们培养细胞的过程中,对细胞进行传代是一项常规的操作,传代可以帮助我们扩大细胞培养的数量,同时也避免了因细胞进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。今天我们简单讲讲传代操作(主要针对贴壁细胞)。
把我们准备的器材放入超净台,打开紫外照射灭jun,值得注意的是若是培养的细胞对温度比较敏感,可以将含血清的培养基瓶子(包括盛放胰酶的瓶子)放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭jun,当然一般的细胞对培养基的温度不是很敏感,不用对培养基加温也是可以的。另外,细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。
操作步骤:
1、紫外照射灭jun后,我们应该穿好灭jun服,戴好灭jun手套和口罩。
2、从培养箱取出细胞培养瓶(一般选择处于对数期的细胞),用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消du,转移培养瓶到超净台。
3、打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次(注意从侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。
4、可用移液器加入1-2ml胰酶(具体量根据实验需要确定,此处仅为参考用量),“十字”晃动,使胰酶充分接触细胞。
5、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化,用75%的酒精喷洒培养瓶表面,转移到超净台。
6、用移液器(或巴氏吸管)加入等量含血清培养基,终止消化。移液器(或巴氏吸管)充分吹打(动作也不要太猛,毕竟细胞也是蛮脆弱的),使细胞能够完全脱落。
7、将培养瓶中混合液体转移至离心管中(离心管规格根据实验需要确定),配平,离心5分钟左右(离心机转速根据细胞种类而定,常见的有1000rpm/min)
8、离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。
9、加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。
10、将细胞悬液分装进2个(或多个)洁净灭jun培养瓶,加入适量培养基,盖好盖子
11、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。
12、在培养瓶上做标记,注明传代时间,细胞种类,操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面,然后应记得整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。