ELISA是以免yi 学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
(4) 终止液(2MH2SO4):蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M柠檬酸(19.2克/L)24.3ml 加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml底物缓冲液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
(7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5)1ml 3%H2O2 2μl
(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
(9) 正常人血清和阳性对照血清。
2. 器材:
(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。
(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
(3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。