在实际筛选时,主要从血清外观和实验操作时细胞的生长状态进行。具体策略如下:
从外观上:
1. 颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血,因为胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂;
2. 澄清度:高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡;
3. 血清沉淀:血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有影响,沉淀的产生原因跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关,在实验操作中可能会对细胞观察产生影响。
从性能上:
1. 细胞形态,在进行血清筛选时首先观察细胞的生长形态是否产生明显变化,以及观察贴壁细胞的贴壁情况,细胞在不同血清培养中可能会出现形态上的差异;
2. 倍增时间,一般情况下会选择倍增时间短的血清,值得注意的是血清的影响会传至5代,在进行测试时,zui好培养五代后进行计倍增时间的计算;
3. 克隆形成率,测试时一般选50、100、200个细胞进行平板克隆测试,平均5d左右换一次液,两周后染色计数,对比克隆形成情况。