猪流行性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒说明书

1、试剂盒简介货为了适应猪流行性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要，本公司参照 OIE 国际标准中规定的引物序列，经多次实验及系统优化，开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、**操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。

2、试剂盒组成:

试剂盒组成包括核酸提取试剂和核酸扩增试剂，具体组成参见表 1：s

表 1：试剂盒组成（50test/盒）

样本处理及要求：

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

试剂盒组成及试剂配制：

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

特点优势：

   1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对**种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。

   2.  重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

   3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中**的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

   4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

   5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

   6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

样本：血清 血浆 组织匀浆等液体样本

标记物：血清 血浆 组织匀浆等

应用：仅用科研实验检测定量，定性检

检测方法：夹心法

技术要求：全程按说明书步骤检测，操作规范，专业，仪器设备齐全。

规格：48t/96t 

性状：液体 

运输方式：快递发货 

有效期：6个月品

特点：灵敏性高，---性，吸附均匀，吸附性好，回收利用率高，是一款可以让您放心选购的产品。

使用范围：此产品供科研实验使用，不得用于---。

用途：用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中的含量或活性。

注意事项:

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

3.请每次测定的同时做标准曲线，*好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用。

9.不能使用过期产品。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 

每个样品测试反应体系配制见下表 2。

表 2 每个样品测试反应体系配制表

注：本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。