iPLA2小鼠钙非依赖性磷脂酶A2ELISA方法

样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

包装规格：液体盒装 96T/48T
保存条件：2-8℃（长期不使用时，部分试剂应放在-20℃条件下）。
有效期：6个月
存储运输：低温避光，请勿重压，轻拿轻放（现货供应，一般为快递运输，江浙沪隔天到，外地及偏远地方三至五天时间到货。）
Elisa试剂盒可测种属：人、大鼠、小鼠、��子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
Elisa试剂盒适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床。

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.         加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.         弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
5.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.         依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
样本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
二氧化酶(DAO)检测试剂盒(酶联吸附试验法)越南芽孢杆Guinea pig ATXN2 (Ataxin 2) ELISA Kit

间粘附分子5(ICAM5)检测试剂盒(酶联吸附试验法)小孢根霉华变种Guinea pig PRKAα1 (Protein Kinase, AMP Activated Alpha 1) ELISA Kit

血栓素B2(TXB2)检测试剂盒(酶联吸附试验法)海洋南海所Guinea pig MUC13 (Mucin 13) ELISA Kit

激肽释放酶10(KLK10)检测试剂盒(酶联吸附试验法)寡雄腐霉Guinea pig NP (Nandrolone Phenylpropionate) ELISA Kit

激肽释放酶11(KLK11)检测试剂盒(酶联吸附试验法)乳酸乳球乳亚种Guinea pig CDNF (Cerebral Dopamine Neurotrophic Factor) ELISA Kit

9kDa信号识别颗粒(SRP9)检测试剂盒(酶联吸附试验法)链霉Guinea pig CDT (Carbohydrate Deficient Transferrin) ELISA Kit

粒特异性抗核抗体(GSANA)检测试剂盒(酶联吸附试验法)串珠镰孢*Guinea pig CA242 (Pancreatic Carcinoma Markers-CA242) ELISA Kit

甲状腺自身抗体(THAA)检测试剂盒(酶联吸附试验法)大肠埃希氏杆Guinea pig SAP (Serum Amyloid P Component) ELISA Kit

周期素依赖性激酶5(CDK5)检测试剂盒(酶联吸附试验法)扣囊复膜孢酵母Guinea pig CD109 (Cluster of Differentiation 109) ELISA Kit

环加氧酶2(PTGS2)检测试剂盒(酶联吸附试验法)黑曲霉Guinea pig PDGFRα (Platelet Derived Growth Factor Receptor Alpha) ELISA Kit

Dickkopf相关蛋白1(DKK1)检测试剂盒(酶联吸附试验法)金针菇BGuinea pig CASP 9 (Caspase 9) ELISA Kit

羟赖氨酸(Hyl)检测试剂盒(酶联吸附试验法)黄絮鳞鹅膏Guinea pig PIINP (Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit

金属硫蛋白3(MT3)检测试剂盒(酶联吸附试验法)酮丁梭Guinea pig PAR3 (Protease Activated Receptor 3) ELISA Kit

棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)检测试剂盒(酶联吸附试验法)球毛壳Guinea pig FGFBP1 (Fibroblast Growth Factor Binding Protein 1) ELISA Kit

内肽2(EM2)检测试剂盒(酶联吸附试验法)枯草芽孢杆Guinea pig NUP98 (Nucleoporin 98kDa) ELISA Kit
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