PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 样本保存液含染料(粉红色)
规格: 2.5L
货号:BH-P63229
公司产品仅用于科研分类:DNA提取试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
同型半胱氨酸(Hcy)检测试剂盒英文名称:Hcy ELISA Kit磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体包装1g
铁调素(Hepc)检测试剂盒英文名称:Hepc ELISA Kit双调蛋白(结肠直肠源性生长因子)抗体包装250mg
铁蛋白(Ferritin)检测试剂盒英文名称:Ferritin ELISA Kit磷酸化通道蛋白2抗体包装100g
铁蛋白(FE)检测试剂盒英文名称:FE ELISA Kit粘附相关激酶抗体包装25g
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒英文名称:AST ELISA Kit磷酸化粘附相关激酶抗体包装5g
天冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒英文名称:AST ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B抗体包装1g
糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒英文名称:GP-MM ELISA Kit磷酸化通道蛋白2抗体包装5g
糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒英文名称:GP-II ELISA Kit磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体包装1g
糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒英文名称:GP-BB ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B抗体包装1g
糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒英文名称:GSK ELISA Kit磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体包装5g
糖缺失性转铁蛋白(CDT)检测试剂盒英文名称:CDT ELISA Kit磷酸化活化转录因子4抗体包装1g
糖皮质类固醇受体(GR)检测试剂盒英文名称:GR ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装5g
糖皮质受体β(GR-β)检测试剂盒英文名称:GR-β ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装5mg
糖皮质受体α(GR-α)检测试剂盒英文名称:GR-α ELISA Kit磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体包装1g
糖类抗原199(CA199)检测试剂盒英文名称:CA199 ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B抗体包装1g
样本保存液含染料(粉红色)CDC42EP5 Antibody淡紫拟青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CDCA4 Antibody麦根腐平脐蠕孢拉丁属名: Bipolaris sorokiniana
CDCA3 Antibody黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger
CDCA4 Antibody枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis
CDCA7 Antibody枯草芽孢杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CDH16 Antibody皱纹单胞菌拉丁属名: Rugamonas rubra
CDH20 Antibody白叶枯病菌*拉丁属名: Xanthomonas oryzae
CDH22 Antibody镶边链霉菌拉丁属名: Streptomyces fimicarius
CDH10 Antibody葡萄座腔菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CDH23 Antibody大肠杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用