使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 非冻型组织RNA保存液
规格: 250 mL
货号:BH-P63241
公司产品仅用于科研分类:DNA提取试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
脑啡肽原B(PDYN)检测试剂盒英文名称:PDYN ELISA Kit乙脱氢酶2型抗体包装5g
脑啡肽原A(PENK)检测试剂盒英文名称:PENK ELISA Kitγ-氨基丁酸脱氢酶抗体包装1g
脑肠肽(Gehrelin)检测试剂盒英文名称:Gehrelin ELISA Kit衰老相关蛋白5抗体包装25g
脑肠肽(BGP/Gehrelin)检测试剂盒英文名称:BGP/Gehrelin ELISA Kit磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体包装5g
末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)检测试剂盒英文名称:TCC C5b-9 ELISA Kit釉基质蛋白抗体包装1g
膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)检测试剂盒英文名称:ANX-Ⅴ ELISA Kit磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体包装25g
缪勒管抑制物质/抗缪勒管(AMH)检测试剂盒英文名称:AMH ELISA Kit磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体包装5g
苗条素受体(LR/Ob-R)检测试剂盒英文名称:LR/Ob-R ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装1g
球蛋白M(IgM)检测试剂盒英文名称:IgM ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装5g
球蛋白G4(IgG4)检测试剂盒英文名称:IgG4 ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装1g
球蛋白G2(IgG2)检测试剂盒英文名称:IgG2 ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装5g
球蛋白G1(IgG1)检测试剂盒英文名称:IgG1 ELISA Kit锚定蛋白重复结构域蛋白激酶ANKK1抗体包装1g
球蛋白G(IgG)检测试剂盒英文名称:IgG ELISA Kit磷酸化内收蛋白抗体包装25g
球蛋白E(IgE)检测试剂盒英文名称:IgE ELISA Kit膜粘连蛋白11抗体包装5g
球蛋白D(IgD)检测试剂盒英文名称:IgD ELISA Kit膜粘连蛋白13抗体包装100mg
非冻型组织RNA保存液CIDEB Antibody注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CIB3 AntibodyAu(黑木耳)注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CIT Antibody巧克力色微杆菌拉丁属名: Microbacterium chocolatum
CKS1B AntibodyAg13(蘑菇)注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
CKS2 Antibody酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
CKMT2 Antibody巴氏葡萄球菌拉丁属名: Staphylococcus pasteuri
CKS1B Antibody东方伊萨酵母拉丁属名: Issatchenkia orientalis
CKS2 AntibodyMethylobacterium拉丁属名: Methylobacterium
CLASP1 Antibody烟曲霉拉丁属名: Aspergillus fumigatus
CLASP1 Antibody米根霉拉丁属名: Rhizopus oryzae
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。