PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63286
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
可溶性CD80(sCD80/B7-1)检测试剂盒英文名称:sCD80/B7-1 ELISA Kitβ1,3半乳糖转移酶3抗体包装25g
可溶性CD80(sCD80)检测试剂盒英文名称:sCD80 ELISA Kit红阴离子交换蛋白1抗体包装500g
巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)检测试剂盒英文名称:GM-CSF ELISA Kit脑特定蛋白Brn3B抗体包装5g
巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒英文名称:MIP-1α/CCL3 ELISA KitBcl-2同源结构域蛋白抗体包装100g
巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)检测试剂盒英文名称:MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit骨形态发生蛋白4抗体包装25g
巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2)检测试剂盒英文名称:MCP-1/CCL2 ELISA Kit脑和急性白血病胞浆蛋白抗体包装5g
胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)检测试剂盒英文名称:GDNF ELISA Kit骨髓基质干抗原2抗体包装25g
碱性成纤维细胞生长因子9(FGF9)检测试剂盒英文名称:FGF9 ELISA Kit组蛋白相关Bmi1抗体包装5g
激活素A(Activin A)检测试剂盒英文名称:Activin A ELISA Kit癌转移抑制基因1抗体包装100mg
活化素A(Activin-A)检测试剂盒英文名称:Activin-A ELISA Kit大脑富含鸟苷酸激酶相关蛋白抗体包装5MG
核心蛋白聚糖(DCN)检测试剂盒英文名称:DCN ELISA Kit脑富含膜附着信号蛋白1抗体包装5g
肝细胞生长因子受体(c-MET/HGFR)检测试剂盒英文名称:c-MET/HGFR ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白3抗体包装1g
分化簇抗原30配体(CD30L)检测试剂盒英文名称:CD30L ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白抗体包装5g
二肽基肽酶IV(DPP4/CD26)检测试剂盒英文名称:DPP4/CD26 ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白4抗体包装1g
二肽基肽酶4(DPP4/CD26)检测试剂盒英文名称:DPP4/CD26 ELISA Kit炭疽杆菌菌体蛋白抗体包装5g
马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒EMX1 Antibody肉红镰孢拉丁属名: Fusarium incarnatum
EMB Antibody大肠埃希菌拉丁属名: coli
ENAH Antibody黑曲霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
EMX2 Antibody密歇根链霉菌*拉丁属名: Streptomyces michiganensis
ENO2 Antibody葡萄座腔菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
ENPP3 Antibody枯草芽孢杆菌枯草亚种拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis
ENTPD1 Antibody短小芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus pumilus
ENTPD1 Antibody普通变形杆菌拉丁属名: Proteus vulgaris
EOMES Antibody罗氏菌属注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
EPG5 Antibody耐冷冷杆菌拉丁属名: Cryobacterium psychrotolerans