使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 非洲马瘟病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63350
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)检测试剂盒英文名称:FGFR1 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白157抗体包装5g
成纤维细胞生长因子7(FGF7)检测试剂盒英文名称:FGF7 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白90B抗体包装10MG
成纤维细胞生长因子3(FGF3)检测试剂盒英文名称:FGF3 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白144A抗体包装25g
成纤维细胞生长因子23(FGF23)检测试剂盒英文名称:FGF23 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白104抗体包装5g
成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒英文名称:FGF18 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白12抗体包装1g
成纤维细胞生长因子15(FGF15)检测试剂盒英文名称:FGF15 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白67抗体包装25g
成纤维细胞生长因子13(FGF13)检测试剂盒英文名称:FGF13 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白129抗体包装5g
成纤维细胞生长因子12(FGF12)检测试剂盒英文名称:FGF12 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白107抗体包装1g
成纤维细胞生长因子11(FGF11)检测试剂盒英文名称:FGF11 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白18抗体包装5g
成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)检测试剂盒英文名称:FAPα ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白56抗体包装1g
沉默调节蛋白6(SIRT6)检测试剂盒英文名称:SIRT6 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白116抗体包装5g
沉默调节蛋白1(SIRT1)检测试剂盒英文名称:SIRT1 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白117抗体包装1g
超氧化物歧化酶1(SOD1)检测试剂盒英文名称:SOD1 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白127抗体包装100g
肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)检测试剂盒英文名称:FABP2 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白138抗体包装25g
叉头框蛋白P3(FOXP3)检测试剂盒英文名称:FOXP3 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白144NL抗体包装5g
非洲马瘟病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒KH5 Antibody燕麦镰孢拉丁属名: Fusarium avenaceum
KH7 Antibody产黄纤维单胞菌用途: 利用纤维素能力强
KIP1 Antibody碳样小单孢菌拉丁属名: Micromonospora carbonacea
KIP3 Antibody转因玉米NK603质粒分子标准物质拉丁属名: GBW10086
KJ10 Antibody苏云金芽孢杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
KIP3 Antibody酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
KJ16 Antibody乳乳球菌乳亚种拉丁属名: Lactococcus lactis subsp.lactis
KJ16 Antibody塔宾曲霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
KJ2 Antibody嗜冷希瓦氏菌拉丁属名: Shewanella psychrophila
KJ2 Antibody土地杆菌拉丁属名: Pedobacter sp.
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。