使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 波氏杆菌(博代氏杆菌,博德特氏杆菌)通用探针法荧光定量PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63358
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实��;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
δ样蛋白1同源物(δLK1)检测试剂盒英文名称:δLK1 ELISA Kit1号染色体开放阅读框177抗体包装1g
γ-内啡肽(γEP)检测试剂盒英文名称:γEP ELISA Kit1号染色体开放阅读框183抗体包装250mg
γ-谷氨酰转移酶1(γGT1)检测试剂盒英文名称:γGT1 ELISA Kit克仑特罗/瘦肉精抗体包装25g
γ-氨基丁酸A受体α2(γABRα2)检测试剂盒英文名称:γABRα2 ELISA Kit6号染色体开放阅读框151抗体包装5g
γ-氨基丁酸(γABA)检测试剂盒英文名称:γABA ELISA Kit15号染色体开放阅读框52抗体包装100mg
β-血小板球蛋白(βTG)检测试剂盒英文名称:βTG ELISA Kit2号染色体开放阅读框89抗体包装1g
β细胞素(βTC)检测试剂盒英文名称:βTC ELISA KitBCL10结合蛋白和激活核转录因子抗体包装5g
β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)检测试剂盒英文名称:βACE1 ELISA Kit凋亡加强结构域蛋白15抗体包装25g
β-内啡肽(βEP)检测试剂盒英文名称:βEP ELISA Kit慢性白血病缺失基因6蛋白抗体包装5g
β-骨胶原交联(βCTx)检测试剂盒英文名称:βCTx ELISA Kit13号染色体开放阅读框38抗体包装25g
β2-微球蛋白(β2M)检测试剂盒英文名称:β2M ELISA Kit14号染色体开放阅读框140抗体包装5g
α-生育酚转运蛋白(TTPα)检测试剂盒英文名称:TTPα ELISA Kit阳离子转运调节样蛋白2抗体包装1g
α-乳清蛋白(αLA)检测试剂盒英文名称:αLA ELISA Kit15号染色体开放阅读框62抗体包装5g
α-内啡肽(αEP)检测试剂盒英文名称:αEP ELISA Kit15号染色体开放阅读框41抗体包装100g
α-骨胶原交联(αCTx)检测试剂盒英文名称:αCTx ELISA Kit环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗体包装25g
波氏杆菌(博代氏杆菌,博德特氏杆菌)通用探针法荧光定量PCR试剂盒KRT4 Antibody根霉属拉丁属名: Rhizopus sp.
KRT37/38 Antibody金黄壳囊孢拉丁属名: Cytospora sacculus
KSR2 Antibody三叉爪鬼笔注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
KRT77 Antibody鹰嘴豆中间根瘤菌拉丁属名: Mesorhizobium ciceri
KSHV ORF57 Antibody空肠弯曲杆菌拉丁属名: jejuni
L1/ORF2 Antibody珊瑚诺卡氏菌(珊瑚色诺卡氏菌,珊瑚红诺卡氏菌,小原放线菌)拉丁属名: Nocardia corallina
L1CAM Antibody枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis
LAIR2 Antibody短小芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus pumilus
LAMA4 Antibody艾比湖嗜盐碱红菌拉丁属名: Natronorubrum aibiense
LAMA5 Antibody枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。