PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 毛细线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒
规格: 50次
货号:BH-P63501
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
八角枫(标准品)英文名称: Strontium chloride, hexhydrate磷酸化埃兹蛋白抗体包装100mg
八角茴香(标准品)英文名称: Calcium sulfate, dihydrate嗜酸性粒阳离子蛋白抗体包装100mg
八角莲(标准品)英文名称: dCMP, 2'-Deoxycytidine 5'-monophosphate, free acidE1A样分化抑制因子3抗体包装25mg
八角麻(标准品)英文名称: DSS骨骼肌烯化酶抗体包装1g
巴豆(标准品)英文名称: Adenosine deaminase from calf spleen 15U/mg真核翻译起始因子2C1抗体包装25g
巴豆苷(标准品)英文名称: Alloxan, monohydrate磷酸化eIF4E结合蛋白抗体包装5g
巴戟天(标准品)英文名称: Ammonium citrate, dibasic附睾蛋白酶抑制蛋白包装1g
巴利森苷A;派立辛(标准品)英文名称: Calcium (L)-lactate, pentahydrate内皮素B受体抗体包装5g
巴西苏木素(标准品)英文名称: dTMP, 2'-Deoxythymidine-5'-monophosphate disodium salt大肠杆菌脂多糖抗体包装1g
芭蕉根(标准品)英文名称: DulcitolGLP1类似蛋白Exendin4抗体包装5g
菝葜皂苷元,知母皂苷元(标准品)英文名称: Melezitose hydrate磷酸化真核翻译起始因子4B抗体包装100g
白当归脑(标准品)英文名称: PEG 20000上皮癌转化蛋白2抗体包装25g
白当归素(标准品)英文名称: 2-Aminothiazole磷酸化转录因子E2F-1抗体包装500g
白附子(独角莲)(标准品)英文名称: Cerium (III) chloride, heptahydrate磷酸化转录因子E2F-1抗体包装1g
白果(标准品)英文名称: D(+)-Arabitol磷酸化表皮生长因子受体抗体包装1g
毛细线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒RPA32 Antibody林生毛霉拉丁属名: Mucor silvaticus
RPAP2 Antibody腐皮壳属注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或,非药用,非食用
RPA4 Antibody无拉丁属名: Cryptococcus victoriae
RPC2 Antibody木霉属拉丁属名: Trichoderma sp.
RPL10 Antibody薛瓦酵母拉丁属名: Saccharomyces chevalieri
RPL10 Antibody长枝木霉拉丁属名: Trichoderma longibrachiatum
RPH3A Antibody玉米乳杆菌拉丁属名: Lactobacillus zeae
RPL12 Antibody根瘤菌用途: 固氮
RPL10L Antibody炼乳假丝酵母拉丁属名: Candida lactiscondensi
RPL17 Antibody大肠埃希菌拉丁属名: coli